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奶牛乳腺炎是奶牛养殖业中最常见的一种疾病,具有发病率高、流行快等特点,造成奶牛业巨大的经济损失。常用的抗生素预防和治疗法,会引起动物体内甚至牛奶中药物残留和细菌耐药性的增强,间接危害人类健康。因此,寻找一种安全、高效的抗生素替代品成为一个亟待解决的问题。特异性卵黄免疫球蛋白(Egg yolk immunoglobulin,IgY)可治疗由细菌或病毒引起的疾病,具有安全无残留、不产生抗药性、服用简便等优点,是一种具有广阔应用前景的抗生素替代品。本研究以引起奶牛乳腺炎的主要致病菌——金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)为抗原,免疫蛋鸡后获得特异性IgY;经分离、纯化后,测定其纯度、抗体效价以及特异性抗体的含量,用凝集试验,免疫电镜等方法对特异性IgY在体外对金黄色葡萄球菌生长的抑制作用进行了研究;考察了特异性IgY对奶牛多形核白细胞(PMN)和单核巨噬细胞(MΦ)吞噬金黄色葡萄球菌的影响。结果表明,水稀释—两部盐析—凝胶过滤纯化的方法提取IgY纯度可达94.52%;间接酶联免疫吸附分析(ELISA)表明抗体效价在高水平上长时间持续,最高可达1:25600,高效价维持30余天;卵黄中总IgY的含量为9.56 mg/mL,与蛋鸡是否免疫无明显关系,而特异性IgY的含量因蛋鸡免疫而显著增高,从免疫初始的0.4 mg/mL提高到1.57 mg/mL。体外抑菌研究发现,非特异性IgY对金黄色葡萄球菌生长速率无显著影响,而5 mg/mL特异性IgY能够显著抑制其生长(P<0.05),浓度达到10mg/mL时,细菌生长情况与青霉素阳性对照组(100μg/mL)无显著差异(P>0.05)。免疫电镜表明特异性IgY与金黄色葡萄球菌结合,细菌边缘消失,结构发生显著变化。流式细胞检测表明浓度为0.05 mg/mL的特异性IgY,能够显著促进奶牛外周血及乳PMN和MΦ对S.aureus的吞噬作用(P<0.05),而当浓度过大时,则对其吞噬发生抑制。综上,本研究成功制备出高纯度、特异性强的抗S.aureus特异性IgY,体外研究结果表明其能有效于细菌结合,并促进奶牛免疫细胞对S.aureus的吞噬作用,为特异性IgY在奶牛乳腺炎防治应用及其作用机理的研究奠定了基础。