一、研究背景和目的腺病毒（Adenoviruses,AdVs）无包膜,呈二十面体对称,是双链DNA病毒。衣壳蛋白由六邻体蛋白（Hexon）,五邻体蛋白（Penton）和纤维蛋白（Fiber）3种主要蛋白组成。其中,纤维蛋白由尾部（Tail）,杆部（Shaft）和头部（Knob）3个结构域构成。腺病毒根据宿主的不同,可分为人腺病毒（Humanadenovirus,HAdV）,鼠腺病毒（Mouse adenovirus,MAdV）,猴腺病毒（Simianadenovirus,SAdV）等。正常人群里,人2型和5型腺病毒较少见。人3型腺病毒常引起婴幼儿及儿童重症感染。器官移植及肿瘤治疗人群中,常由于免疫力低下而引起腺病毒的感染。因此,急需抗腺病毒药物和疫苗,而药物研制和疫苗研发需合适的动物模型,腺病毒的宿主特异性限制了其进一步研究。为此,我们利用环磷酰胺（CYP）,构建人3型腺病毒免疫抑制小鼠感染模型。鼠腺病毒在小鼠中多呈隐性,长期带毒,现报道有3个血清型:MAdV-1 FL,MAdV-2K87,MAdV-3。正常情况下,人3型腺病毒无法感染小鼠以及小鼠细胞,推测可能是因为小鼠细胞表面不含有人3型腺病毒受体所致。因此,本课题进一步通过构建含有MAdV-1 FL嵌合型纤维蛋白的HAdV-3载体,以期构建一种可以感染小鼠细胞的新型的人3型腺病毒。二、研究方法1、构建HAdV-3免疫抑制小鼠感染模型给予BALB/c小鼠一次性腹腔注射CYP 5天后,给予小鼠HAdV-3滴鼻,之后,每隔3天进行解剖,分别从小鼠体重变化,肺组织病理切片,肺组织腺病毒DNA载量,细胞因子等水平,综合评价该模型。2、构建置换了 MAdV-1纤维蛋白的HAdV-3重组腺病毒,建立小鼠感染模型利用HAdV-3骨架载体pBRAd3ΔE3GFP-1,以MAdV-1 FL株knob为靶基因,设计左右同源臂,融合PCR。再利用细菌内同源重组法,将骨架载体与融合片段重组,得到含有MAdV-1纤维蛋白的重组载体,将其转染到293FT细胞,包装病毒。三、结果1、HAdV-3免疫抑制小鼠感染模型滴鼻后,HAdV-3进入到小鼠各组织。免疫抑制组小鼠体重在第3天下降至最低值,之后上升,且有小鼠发生死亡,肺中分离得到活病毒颗粒。病毒基因组在整个试验中未发生突变。2、构建了重组载体 pBRAd3ΔE3GFP-1-LknobR顺利得到融合PCR产物LknobR,经与骨架载体pBRAd3ΔE3GFP-1重组,置换得到含有MAdV-1纤维蛋白的重组载体pBRAd3ΔE3GFP-1-LknobR,转染至293FT细胞,检测到GFP蛋白的表达。四、结论1、构建的HAdV-3免疫抑制小鼠感染模型,方便,简单,适用,为抗病毒药物研发提供有效的研究平台。2、构建的HAdV-3与MAdV-1嵌合型纤维蛋白重组病毒,为后期小鼠腺病毒感染模型构建奠定基础。