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[目的]
以国内外现有研究为基础，通过体内外实验，探讨长春瑞滨、西妥昔单抗及联合热疗的抗血管生成作用。
[方法]
1.利用四甲基偶氮唑盐(MTT)法，检测长春瑞滨及西妥昔单抗对人肺腺癌A549细胞、人乳腺癌MCF-7细胞和人肠癌LOVO细胞增殖的抑制作用，筛选出药物最敏感的肿瘤细胞株；
2.以药物最敏感的肿瘤细胞株为对照，利用MTT法，测定长春瑞滨、西妥昔单抗及联合热疗对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)增殖能力的抑制作用；热疗方法采用电热恒温水浴法加热至43℃，持续30min；
3.采用Transwell小室模型，观察长春瑞滨、西妥昔单抗以及长春瑞滨联合西妥昔单抗对HUVEC细胞迁移的影响；
4.通过体外小管形成实验，观察长春瑞滨、西妥昔单抗以及长春瑞滨联合西妥昔单抗对HUVEC形成管网腔样结构的影响；
5.利用流式细胞术(FCM)，评判长春瑞滨、西妥昔单抗以及长春瑞滨联合西妥昔单抗对HUVEC细胞凋亡的作用；
6.采用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型，观察长春瑞滨、西妥昔单抗以及长春瑞滨联合西妥昔单抗对鸡胚尿囊膜体内新生血管的影响。
[结果]
1.长春瑞滨具有抑制A549细胞、MCF-7细胞及LOVO细胞生长增殖的作用，半数抑制浓度(IC50)分别为0.18μg/ml、7.90μg/ml及11.81μg/ml，细胞为本实验中对于长春瑞滨最为敏感的肿瘤细胞株；西妥昔单抗对A549细胞、MCF-7细胞及LOVO细胞的生长增殖具有抑制作用，IC50分别为57.35μg/ml、62.96μg/ml及34.72μg/ml，即LOVO细胞为本实验中对西妥昔单抗最为敏感的肿瘤细胞株。
2.长春瑞滨在0.1～1.0ng/ml时对A549细胞增殖的抑制明显低于对HUVEC细胞增殖的抑制，具有差异细胞毒作用(P=0.000)；0.1～1.0ng/ml长春瑞滨对HUVEC增殖抑制率为25.76％～62.27％，抑制作用与浓度呈正相关(r=0.993，P=0.000)。西妥昔单抗在0.0625～2.0μg/ml时对LOVO细胞增殖的抑制作用低于对HUVEC细胞增殖的抑制作用，差异具有统计学意义(P=0.001)；0.0625～2.0μg/ml西妥昔单抗对HUVEC增殖抑制率为12.34％～25.26％，抑制作用与浓度呈正相关(r=0.834，P=0.039)。0.1ng/ml、0.2ng/ml、0.4ng/ml、0.6ng/ml长春瑞滨联合0.25μg/ml西妥昔单抗对HUVEC增殖抑制率分别为29.45％、37.91％、46.36％、54.88％，联合用药表现为次加效应，0.8ng/ml和1.0ng/ml长春瑞滨联合0.25μg/ml西妥昔单抗对HUVEC增殖抑制率分别为64.55％和73.29％，联合用药表现为协同效应。单独热疗对HUVEC增殖抑制率为22.44％；0.1ng/ml、0.2ng/ml、0.4ng/ml、0.6ng/ml长春瑞滨联合热疗对HU-VEC增殖抑制率分别为29.50％、35.78％、42.68％、48.77％，联合用药表现为次加效应，0.8ng/ml和1.0ng/ml长春瑞滨联合热疗对HUVEC增殖抑制率分别为64.85％和70.83％，联合用药表现为协同效应。0.0625～2.0μg/ml西妥昔单抗联合热疗对HUVEC增殖抑制率分别为25.14％、25.03％、29.11％、34.36％、37.29％、40.25％，联合用药表现为次加效应。
2.长春瑞滨在0.1～0.8ng/ml时，呈剂量依赖性抑制HUVEC迁移，发生迁移的HUVEC数目随长春瑞滨浓度的增加而减少(r=-0.954，P=0.000)，迁移抑制率在20.56％～57.87％之间。西妥昔单抗在0.0625～1.0μg/ml时，抑制HUVEC迁移率在15.51％～48.68％之间，发生迁移的HUVEC数目随西妥昔单抗浓度的增加而减少(r=-0.964，P=0.000)；0.1ng/ml、0.4ng/ml、0.8ng/ml长春瑞滨联合0.25μg/ml西妥昔单抗抑制HUVEC迁移率分别为51.87％、68.20％、94.95％，两药联合应用表现为抗HUVEC迁移的协同效应。
3.长春瑞滨(0.1～0.8ng/ml)、西妥昔单抗(0.0625～1.0μg/ml)及联合用药(0.1～0.8ng/ml长春瑞滨联合0.25μg/ml西妥昔单抗)均表现出抑制HUVEC小管形成的作用，经药物作用后的网管样结构的宽度和长度都明显减少，小管管腔也趋于稀少及不完整。药物抑制小管形成率在0.1～0.8ng/ml长春瑞滨组为29.07％～56.83％；在0.0625～1.0μg/ml西妥昔单抗组为22.91％～44.71％；在联合用药组，0.1ng/ml、0.4ng/ml长春瑞滨联合0.25μg/ml西妥昔单抗抑制小管形成率分别为38.77％和57.71％，联合用药表现为次加效应，0.8ng/ml长春瑞滨联合0.25μg/ml西妥昔单抗抑制小管形成率为78.85％，联合用药表现为协同效应。
4.小剂量长春瑞滨及西妥昔单抗具有诱导HUVEC细胞凋亡作用，凋亡率在0.1ng/ml、0.4ng/ml、0.8ng/ml长春瑞滨组分别为22.30％、30.10％、37.05％，在0.25μg/ml、1.0μg/ml西妥昔单抗组分别为33.20％、35.05％；0.8ng/ml长春瑞滨联合0.25μg/ml西妥昔单抗诱导HUVEC凋亡率为59.90％，联合用药表现为协同效应。
5.小剂量长春瑞滨及西妥昔单抗对体内鸡胚尿囊膜新生血管生成具有抑制作用，并呈现浓度相关性，即随着药物浓度增加抑制作用增强。长春瑞滨在0.1～0.8ng/ml时，对CAM新生血管的抑制率为21.05％～42.11％；西妥昔单抗在0.0625～1.0μg/ml时，对CAM新生血管的抑制率为20.39％～36.18％。0.1ng/ml长春瑞滨联合0.25μg/ml西妥昔单抗对CAM新生血管生成的抑制率为31.56％，表现为次加效应，0.4ng/ml及0.8ng/ml长春瑞滨联合0.25μg/ml西妥昔单抗对CAM新生血管的抑制率分别为48.03％和65.13％，表现为协同效应。
[结论]
小剂量长春瑞滨和西妥昔单抗在体内外具有一定的抑制血管生成作用，两者联合具有抗血管生成的次加或协同效应；联合热疗具有体外抗血管生成的次加或协同效应。