有机磷农药多残留酶联免疫吸附分析方法的研究

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本研究以建立环境中有机磷农药多残留的酶联免疫吸附分析(ELISA)方法为目标,设计合成了有机磷农药通用半抗原,通过结合载体蛋白质制备了通用人工抗原,免疫动物获得了抗多种有机磷农药的群特异性抗血清。在所获得抗体的基础上,建立了有机磷农药多残留ELISA方法。所建立的方法为有机磷农药的快速多残留检测提供了技术手段,具有一定的使用价值和推广应用前景。主要研究结果如下:1.通过O,O-二乙基硫代磷酰氯和4-氨基丁酸反应合成了有机磷农药通用半抗原二乙基-N-(3-羧基丙基)硫逐磷酰胺酯(简称DENP),并进行了结构鉴定。2.采用碳二亚胺法将DENP与牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清蛋白(OVA)进行偶联,制备了通用人工抗原DENP-BSA和包被原DENP-OVA。经鉴定,结合比分别为12︰1和17:1。3.将通用人工抗原DENP-BSA免疫两只新西兰大白兔,采血获得了针对有机磷农药的群特异性抗血清,效价分别1:102400和1:25600。4.考察了9种有机磷农药与抗血清的亲和性,发现与半抗原DENP结构高度相似的甲拌磷、乙拌磷,内吸磷与抗体的亲和性最好;与DENP同样含有直链烃结构,但另一端为二甲氧基(硫代)磷酸酯的氧乐果和乐果与抗体的亲和性次之;与DENP一样含有二乙氧基硫代磷酸酯结构,但另一端连接基团为芳环或杂环的辛硫磷、二嗪农、喹硫磷及毒死蜱和抗体的亲和性较弱。5.建立了用于检测甲拌磷、内吸磷的间接竞争ELISA方法的标准曲线,检测限分别为0.0037mg/L和0.033mg/L。对水样中添加的甲拌磷和内吸磷进行测定,得回收率范围为108.00%~112.00%。
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