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WRKY转录因子是植物特有的转录因子,通过调节激素、靶基因的活性等多种途径,参与植物的衰老、逆境胁迫响应等生理生化过程。本研究以毛竹(Phyllostachys edulis)为实验材料,运用定量PCR、酵母单杂交和转基因等方法,对4个WRKY基因进行相关的研究,初步探索WRKY基因在衰老、逆境胁迫和激素信号调控通路中发挥的作用。主要研究结果如下:1.基因克隆及序列分析从毛竹中克隆出4个WRKY基因,分别命名为PheWRKY1-1、PheWRKY11-2、PheWRKY50-1和PheWRKY76,c DNA序列长度分别为1686 bp、1023 bp、1023 bp和909bp。4个WRKY蛋白不含有信号肽、跨膜结构域,属于疏水性蛋白,均存在互作的蛋白;上游启动子区域含有与逆境胁迫和激素响应相关的作用元件;系统进化树分析和序列比对结果显示,这4个WRKY基因与单子叶物种进化关系更近,与双子叶物种进化关系较远。2.亚细胞定位表达载体,转化水稻原生质体,在激光共聚集显微镜下观察其表达位置,结果显示3个WRKY基因均在细胞核中表达。3.转录活性分析将PheWRKY1-1、PheWRKY11-2和PheWRKY50-1分别克隆到p GBKT7载体中,转化酵母,结果显示在酵母中PheWRKY50-1具备转录自激活活性,而PheWRKY1-1和PheWRKY11-2没有转录自激活活性。4.基因表达分析通过实时定量PCR实验对PheWRKY1-1、PheWRKY11-2、PheWRKY50-1和PheWRKY76基因的表达模式进行分析,结果表明,在不同的组织器官中,各个基因的表达模式存在明显的差异,PheWRKY1-1主要在根中表达,PheWRKY50-1集中在叶片中表达;在同株毛竹的叶片中,4个WRKY基因表达量在老叶中明显高于新叶,但随着整体植株的衰老基因表达量无明显变化趋势;在干旱胁迫下,PheWRKY1-1、PheWRKY11-2、PheWRKY50-1和PheWRKY76在茎中均呈现上调表达,同时PheWRKY50-1和PheWRKY76在叶片中有明显地上调表达,PheWRKY1-1和PheWRKY11-2在根部受到诱导表达量上调;在盐胁迫下,PheWRKY1-1、PheWRKY11-2、PheWRKY50-1和PheWRKY76基因表达量在根和茎中均呈现诱导上调;在不同激素(IAA、Me JA、ABA、SA)处理下,PheWRKY1-1、PheWRKY11-2和PheWRKY50-1基因均受到不同程度上调或下调表达。5.转化拟南芥将PheWRKY11-2和PheWRKY50-1基因通过农杆菌介导转化拟南芥,对转基因植株进行不同程度的干旱和盐胁迫处理,观察转基因植株的表型。转基因株系在根长、须根数量和整体长势等方面都优于野生型,植株抗性增强。