骨折是临床的常见病和多发病，对骨折愈合机理的研究一直是骨科界的热门课题，人们试图采用各种办法揭示其中的奥秘，探索其内在的关系，进而应用于临床，降低骨折的不愈合率，减少患者的痛苦。在骨折愈合的研究中，从宏观到微观，从分子生物学到生物力学，从生长因子到组织工程学，涉及的领域众多。骨的形成与生长是一个又分子、细胞以及生化代谢变化所组成的复杂过程。骨可沿两种途径发生，即膜化骨和软骨化骨。虽然光学显微镜水平上已经能够观察到这两种途径间的差别，但是骨的最终形成则是上述两种途径共同出现在同一组织上。当成骨细胞在胶原的支架内形成已钙化的类骨质基质时为膜内化骨，它发生在骨的骨膜表面，次过程始于原始间充质细胞的细胞分化。当成骨细胞在软骨支架表面形成类骨质时为软骨内化骨，它发生生长板和骨折处，在胚胎初期和胎儿发育期间，生长板发生在间充质细胞的软骨团块中。随着对骨分化过程的揭示，及分子生物学的研究方法的引入，将有助于深入了解和探讨骨折修复的机制。骨的修复与生长受多种生长因子的调控，有多种细胞因子可以促进骨的修复。富含血小板的血浆对骨折愈合的影响，已成为近来研究的热点。由于血小板中含有大量的各种生长因子，它们在骨折愈合过程中起着或多或少的作用，它们既可以相互协同又可以相互促进。在这些因子中，最重要的是血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor PDGF）、胰岛素样生长因子（insulin -like growth factor IGF）、骨形成蛋白（bone morphogenitic protein BMP）等,其中PDGF是局部最早出现的生长因子，它促进未分化的细胞的分裂和增殖。 至今为止，有关富含血小板血浆对骨折愈合的影响已有报道，但是在四肢骨骨折修复过程的报道知之甚少。而且通过PDGF、IGF、BMP研究富含血小板血浆对骨折的的修复作用还未见报道。因此我们采用原位杂交、<WP=5>免疫组化及生物力学方法，阐明富含血小板的血浆对骨折愈合的影响。第一部分：富含血小板的血浆中的PDGF在骨折愈合中的表达目的：通过研究PDGF在骨折愈合过程中的表达，探讨富含血小板的血浆对骨折修复的影响，为富含血小板的血浆在临床中的应用提供理论上的依据。方法：建立兔尺骨的动物模型，将成年新西兰兔24只，雌雄不限，体重在2.5~3.0kg，随机分成空白组、血清组、富含血小板血浆组及植骨+富含血小板血浆组。取兔的自体血6毫升，通过低速及高速离心，取浓缩的血小板血浆0.5毫升。模型组用4%戊巴比妥钠0.5 ml/kg，腹腔注射麻醉。沿肌间隙游离尺骨切开骨间膜及骨膜，截断尺骨后用4孔钢板及螺钉行内固定，将高速离心制成的血小板浓缩液，在无菌条件下用明胶海绵吸附血小板浓缩液，将其放置于骨折旁，使其缓慢释放，植骨动物模型，可在手术时将血小板浓缩液直接注入在植骨上，植骨均采用兔右侧自体髂骨。分别在第2、4、8周时处死兔，对其骨折端进行各种检测。应用原位杂交、免疫组化，对实验标本进行分析，了解PDGF在骨折修复过程中的表达。结果：①肉眼观察发现，在空白组和血清组的动物模型中，以纤维连接为主，在骨折周围有大量的肉芽组织，骨痂成分很少。而在富含血小板血浆及植骨+血小板组则以骨性连接为主，周围有少许的肉芽组织。②采用原位杂交研究发现PDGF在富含血小板血浆组的表达最为强，其次是植骨+血小板组，而在空白组和血清组中，PDGF的表达较少。③在免疫组化的染色中，富含血小板血浆中的PDGF表达明显高于其他组，空白的着色最少。结论：富含血小板的血浆中，含有大量的各种因子，它们对骨折的修复起着不同的作用，由于血小板中含有大量的PDGF，它在骨折修复中通过促进成骨细胞的分裂、增殖而发挥了重要作用，PDGF在富含血小板血浆组和植骨+血小板组的表达明显高于其他组，因而富含血小板血浆在临床中有广阔的应用前景。第二部分：兔尺骨骨折愈合过程中富含血小板血浆中的IGF-1基因表 达目的：研究富含血小板血浆中的IGF-1在骨折愈合中的表达，探讨富含血小板的血浆对骨折愈合的影响为其在临床中的应用做好理论基础。方法：建立同样的兔尺骨骨折的动物模型，随机分为空白组、血清组、<WP=6>血小板组和植骨+血小板组，采用同第一部分的方法，提取富含血小板血浆，留置于兔的尺骨骨折处，分别在2、4、8周处死兔，方 法是应用原位杂交、免疫组化及图象分析系统探讨对骨折愈合的影响。结果：①大体肉眼观察，在空白组和血清组的骨折周围仅有的骨骼组织，而大量包绕的是纤维结缔组织和肉芽组织。在富含血小板血浆及植骨+血小板组的骨折周围以骨性组织为主，同时也拌有少许的结缔组织。②在免疫组化和原位杂交的实验中，发现IGF在富含血小板血浆及植骨+血小板组的表达明显增多，染色颗粒多于空白组。结论：由于富含血小板的血浆中含有IGF-1，而IGF对成骨细胞的分裂增殖有明显的刺激作用，在骨折的愈合过程中发挥着重要的作用。在含有IGF-1较多的富含血小板血浆组，其骨折的愈合和细胞着色颗粒明显高于对照组。第三部分：富含血小板的血浆中的BMP在骨折愈合中的表达目的：研究富含血小板的血浆中