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1: BCR/ABL上调细胞外源性S1P目的探讨bcr/abl融合基因对细胞SPK1/S1P信号通路的影响。方法通过转导bcr/abl融合基因,观察bcr/abl融合基因过表达对非慢粒细胞SPK1表达、活性和S1P分泌的影响。利用BCR/ABL酪氨酸激酶特异性阻断剂STI571和MAPK信号通路阻断剂PD98059处理BCR/ABL阳性的慢粒细胞,检测阻断BCR/ABL信号通路对S1P分泌的影响。结果在ECV304和HL-60两种非慢粒细胞中过表达bcr/abl融合基因可显著提高细胞SPK1表达和活性,同时提高细胞S1P的分泌。STI571和MAPK处理慢粒细胞K562后可降低S1P分泌。结论bcr/abl融合基因可通过MAPK信号通路上调细胞SPK1表达、活性和S1P分泌。2:慢粒细胞S1P/S1P2与MAPK信号通路间存在cross-talk目的探讨慢粒细胞中SPK1/S1P信号通路与MAPK信号通路的关系。方法利用RT-PCR技术检测慢粒细胞系K562和慢粒病人外周血单个核细胞中S1P受体的表达情况。用外源性S1P处理慢粒细胞中观察MAPK信号通路的磷酸化水平。利用SPK特异性阻断剂DMS处理K562细胞,观察阻断SPK对细胞S1P分泌和MAPK磷酸化水平的影响。通过多种S1P受体激动剂和拮抗剂,确定S1P受体与MAPK信号通路的关系。结果K562和慢粒病人外周血单个核细胞均表达S1P受体。外源性S1P处理K562细胞可增加MAPK磷酸化。而DMS处理K562细胞后可以降低S1P分泌和MAPK磷酸化。S1P2受体拮抗剂JTE-013处理后也可降低MAPK磷酸化。结论MAPK信号通路和SPK1/S1P/S1P2信号通路之间存在cross-talk现象。3:干涉SPK1基因对慢粒细胞的影响目的探讨干涉SPK1基因对慢粒细胞系K562增殖和凋亡的影响。方法利用293细胞生产携带SPK1干涉序列的腺病毒。所生产病毒经CsCl密度梯度离心法纯化后,用以感染细胞,检测细胞增殖和凋亡。结果所生产病毒对K562细胞增殖无明显影响,但可显著增加细胞的凋亡。结论干涉SPK1可增加细胞凋亡。