经皮冠状动脉腔内成形术(PTCA)是冠心病治疗上新的里程碑；但PTCA术 后6个月内再狭窄的发生率高达30～50％，成为其广泛应用和发展的主要障碍。 新近的研究表明，内皮细胞的损伤是再狭窄的启动因素，动脉平滑肌细胞增殖是 决定再狭窄的关键因素，生长因子和原癌基因在再狭窄血管平滑肌细胞增殖过程 中具有重要作用。因而，抑制平滑肌细胞增殖和促进内皮细胞生长对再狭窄的防 治具有重要价值。 因壳多糖具有抑制成纤维细胞生长和促进表皮细胞生长的作用，因此设想壳 多糖亦对平滑肌细胞增殖具有抑制作用和对内皮细胞生长则有促进作用，从而防 治再狭窄的发生。为此，本课题进行了一系列的实验研究。实验结果证实，壳多 糖具有明显抑制动脉平滑肌细胞增殖和促进动脉内皮细胞生长作用。进而对其抗 再狭窄作用及其机制进行了进一步的研究。主要内容和结果如下： 1．壳多糖对家兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞增殖的影响 采用家兔主动脉平滑肌细胞和内皮细胞培养及细胞计数的方法，观察壳多糖 (0．2μ/ml～2000μg／ml)对20％新生小牛血清(NBS)促动脉平滑肌细胞和内皮 细胞增殖作用的影响，结果表明，壳多糖明显抑制NBS诱导的SM增殖(P＜0.01) 和促进内皮细胞生长(P＜0.01)，且有量效和时效关系。 2．壳多糖对平滑肌细胞原癌基因 c－myC mRNA表达的影响 采用家兔主动脉平滑肌细胞培养，按AGPC法抽提细胞总RNA，通过随机 引物标记c－myc探针，应用Northern blot杂交技术，观察壳多糖(2000μg/ml) 对 NBS促动脉平滑肌细胞 c－myc mRNA表达的影响，结果表明，当 NBS刺激血 管平滑肌细胞 24小时后，c－myc mRNA表达较对照组明显增强，当壳多糖与 NBS 合用时，c－myc mRNA表达较 NBS组明显降低，说明壳多糖抑制 NBS促血管平 滑肌细胞 c－myc mRNA表达。 5 — ——————、——————l——u巳虹口口口L口d口】月口c口口口口口巴口口口口一———————“、D】J回回回回回回回回回回回口口回团日问口hU——————h巳D二【回内巳毛回h自——————————————一 第二军医大学博士毕业论文 中文摘要 3．壳多糖对内皮细胞与单核细胞粘附的影响 壳多糖对TNF刺激的兔主动脉内皮细胞和单核细胞粘附升高有显著的抑制 作用，且呈明显剂量依赖性。 4．壳多糖对增殖的血管平滑肌细胞ICa‘”n、［HO i的影响： 近年的研究证明生长因子引起的细胞内【a‘“h浓度增加和nH上升是细胞增 殖必不可少的条件。本实验采用荧光探针标记法观察NBS对VSMC＊a‘”h和mdi 的影响及壳多糖对其的干预作用，结果证实含多种生长因子的NBS刺激VSMC后 ＊a‘“h浓度明显增加，细胞内nH均明显上升；而壳多糖与NBS合用时，LCa‘刁i 浓度降低，胞内PH明显降低。 5．壳多糖支架对兔颈动脉球囊损伤后再狭窄影响 将家兔40只分成五组［对照组、动脉粥样硬化组、球囊损伤再狭窄组、壳多 糖支架组和普拉固＋蒙诺组卜 分别高脂饮食喂养前、5周、10周和 20周后抽血 化验血脂、股动脉插管行颈动脉造影及病理切片。结果发现各组血脂明显高于对 照组，普拉固＋蒙诺组则低于上述实验组，但仍高于对照组；病理切片显示AS组 和RS组有泡沫细胞及大量平滑肌细胞增生，而壳多糖支架组和普拉固＋蒙诺组无 泡沫细胞及大量平滑肌细胞增生；动脉造影见AS组和RS组管腔面积缩小，内膜 增厚，而壳多糖支架组和普拉固＋蒙诺组管腔面积明显增大，内膜厚度明显降低。 这些结果表明壳多糖对防治PTCA术后再狭窄可能具有重要价值，因壳多 糖来源广泛，具有良好的生物相容性，对人体不良反应少，因而提示具有广阔的 临床应用前景。