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粘细菌(Myxobacteria)是原核生物中一类能捕食细菌的革兰氏阴性细菌。不同的粘细菌由于自身分泌的胞外消化酶以及裂解酶的差别,对捕食的细菌也有不同的偏向,但绝大多数倾向于容易被分解消化的革兰氏阴性细菌。大肠杆菌(E.coli)作为一种最常见的革兰氏阴性细菌,常被用作底物来诱导分离粘细菌。另外,粘细菌在刚分离的最初能形成特征明显的子实体,但在经过固体培养基上转接纯化几代后很容易就失去形成子实体的能力,而保存粘细菌的最好形式却是利用稳定的子实体形态,因此,寻找能辅助分离粘细菌或者能促进重新形成子实体的辅助细菌极具意义。 本文以有机质丰富的土壤为分离材料,采用两步法来诱导分离粘细菌及筛选助长细菌,第一步是设计低营养的培养基尽可能富集分离土壤中的细菌,第二步是利用低营养培养基上生长的丰富多样的细菌,放置用放线菌酮浸泡过的土壤来诱导分离粘细菌。其中在三种培养基中最终诱导得到三种不同子实体外观的粘细菌。分离并保存三种培养基上及粘细菌的分离纯化过程中污染的细菌共61株,利用分离得到的61株细菌与失去形成子实体能力的橙色粘球菌8.5(Myxococcus fulvus8.5)进行一一共培养筛选辅助细菌,最终筛选得到两株能促进粘球菌8.5重新形成子实体的辅助细菌。 利用共培养技术来对比及评价辅助细菌对橙色粘球菌8.5的辅助效果。第一,通过不同的培养基进行对比,结果共培养的效果在CY、VY/2、MYX和CYG培养基上橙色粘细菌8.5均有子实体产生;第二,通过不同营养梯度的CY培养基来对比共培养的效果,虽然不同梯度的培养基均能使粘细菌8.5短时间内呈现聚集生长,但在3g/L的胰蛋白胨以及1g/L的酵母粉中共培养效果最佳,粘细菌8.5聚集明显,菌落呈鲜橙色;第三,对橙色粘球菌8.5单独培养以及与辅助细菌共培养的生长形态变化进行体式显微镜以及电子扫描显微镜观察对比,结果发现加入助长细菌的粘细菌8.5生长聚集明显,呈同心圆状,并能形成特殊的波浪状菌落外观,最快能在生长的5天内长成子实体。而与之相反,单独培养的橙色粘球菌8.5则需要大约1个月的时间才能形成小的暗橙色的子实体,且此时粘细菌的转接成活率低。 通过对助长细菌的细胞内含物以及细胞分泌物与粘细菌8.5共培养来分析助长原因,发现发酵上清以及细胞破碎的内含物均有类似与活菌体辅助效果类似的同心圆的生长外观。表明发酵上清以及细胞内含物中可能存在某几种联合因子促进指导粘细菌细胞进行有序聚集,但具体因子还尚待研究,最后对两株助长细菌进行初步鉴定,初步归类于Microvirga以及Achromobacter两个属内。 本文通过筛选橙色粘球菌8.5的助长细菌,并对其助长效果及助长原因进行初步探索,表明了特定种类的粘细菌可能具有偏爱的辅助生长细菌。并且在粘细菌失去形成子实体能力后,能重新刺激诱导粘细菌完成子实体的聚集过程。而这种具体的辅助因子或辅助原因尚需深入研究。