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家蚕二分浓核病毒(Bombyx mori bidensovirus，BmBDV)是2012年国际病毒分类委员会批准新创建的二分DNA病毒科的唯一代表种。家蚕二分浓核病毒是引发家蚕浓核症、造成养蚕业重大经济损失的重要病原之一。BmBDV是首例动物二分DNA病毒，病毒粒子是无囊膜的正二十面体结构，颗粒体直径约22-24nm;BmBDV病毒基因组包括两节段的单链DNA分子(VD1，6.6kb和VD2，6.0kb)分别包装在两种大小相同、结构相近的球形衣壳中;此外，BmBDV基因组还自身编码一个B家族的DNA聚合酶PolB。BmBDV基因组中两个基因编码结构蛋白质，主要结构蛋白VPs由VD1-ORF3编码，vp gene全长1500bp，是病毒衣壳蛋白的组成成分，与BmBDV病毒粒子的包装相关，VP蛋白的jelly-roll样8β-strands结构域与细小病毒衣壳蛋白(CP)高度同源，NS1蛋白保守的S3H结构域也同样暗示BmBDV起源于细小病毒。与细小病毒相比很独特的是，BmBDV还编码病毒另一个较大的结构蛋白质---次要结构蛋白SP，sp基因全长3483bp，SP蛋白理论分子量约为133kDa，与呼肠孤病毒科质型多角体病毒BmCPV的结构蛋白VP3高度同源，主要介导病毒粒子的进入，sp基因只表达一种蛋白质、丰度很低，属于少量的结构蛋白;而关于结构蛋白的组成和VP蛋白的表达策略仍无定论。本实验首先通过蛋白质组学技术检测病毒粒子完整的蛋白质表达图谱;其次，共表达两种结构蛋白VP和SP，解析病毒粒子结构蛋白的自组装情况;再次，通过突变vp基因的第二个起始密码子，分析主要结构蛋白VPs的表达策略。主要结果如下: 1.从感病家蚕中肠组织纯化的病毒粒子作为实验样本，通过二维电泳(2-DE)检测完整的蛋白质表达图谱，鉴定到六种BmBDV病毒粒子蛋白质的肽指纹图谱，分布在分子量50-55kDa，等电点(pI)6.5-7.1之间;再利用质谱(MALDI-TOF-MS)分析所获得的蛋白质表达图谱，这6个结构蛋白都是由主要衣壳蛋白基因vp gene编码的。与VPs蛋白的理论等电点相比，观测值明显发生酸性偏移，二级质谱(MS/MS)解析还发现VP蛋白的Met163处发生了氧化修饰。该结果首次较为全面地揭示了结构蛋白的组成情况。 2.利用杆状病毒(Multibac)表达系统，共表达病毒粒子两种结构蛋白---VPs和SP。将构建的重组病毒Multibac-vp-sp感染Spodoptera frugiperda(sf9)细胞，Western blot检测到两种结构蛋白条带VPs(3种，50-55kDa)和SP(1种，133kDa)，透射电镜(TEM)观察经蔗糖密度梯度离心纯化的VP和SP蛋白表达产物，可见自组装的直径22-24nm的病毒样粒子颗粒VLPs。 3.通过基因定点突变技术将vpgene第二个起始密码子AUG突变后的编码序列插入AcMNPV杆状病毒表达系统，感染昆虫细胞，在polh启动子的调控下重组表达VP2STm蛋白，Western blot未检测到起始于第二个起始密码子表达的结构蛋白，结果证实VPs蛋白确是通过一种漏扫描机制表达产生多种不同的结构蛋白。