【摘 要】
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目的:探究苯并芘（Ba P）染毒大鼠精子DNA损伤所涉及的主要生物途径、信号通路;探究益肾通络方通过lncRNA的调控作用对Ba P染毒大鼠精子DNA损伤所产生的影响。方法:1.30只SD大鼠随机分为3组:溶剂对照组、Ba P染毒组及益肾通络方组,每组10只,用玉米油将Ba P原液稀释成浓度0.1mg/ml的工作液,每日9:00除溶剂对照组外,其余各组均按1ml/kg灌胃量经口染毒,染毒浓度为10
【基金项目】
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国家自然科学基金:基于表观遗传学探讨益肾通络方对苯并（a）芘致生精细胞DNA损伤的防护机制,编号:81573981；
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目的:探究苯并芘（Ba P）染毒大鼠精子DNA损伤所涉及的主要生物途径、信号通路;探究益肾通络方通过lncRNA的调控作用对Ba P染毒大鼠精子DNA损伤所产生的影响。方法:1.30只SD大鼠随机分为3组:溶剂对照组、Ba P染毒组及益肾通络方组,每组10只,用玉米油将Ba P原液稀释成浓度0.1mg/ml的工作液,每日9:00除溶剂对照组外,其余各组均按1ml/kg灌胃量经口染毒,染毒浓度为10mg/（Kg·d）,共染毒60d。溶剂对照组按1ml/kg灌胃玉米油,益肾通络方组大鼠自Ba P染毒第31天开始给与益肾通络方10ml/（Kg·d）灌胃,每次约1.044g/ml,持续30d。2.染毒结束24h后用0.9%戊巴比妥钠麻醉,采集附睾,制备附睾尾精子悬液,用流式细胞仪检测各组的精子DFI。3.每组挑选3只大鼠用高通量测序检测每组大鼠附睾组织差异表达的lncRNA和m RNA,并对差异m RNA进行GO分析和组间Pathway分析。4.Lnc RNA和m RNA关联分析,包括antisense分析、cis作用靶基因预测、trans作用靶基因预测、靶基因功能富集分析。结果:1.成功建立Bap染毒大鼠精子DNA损伤模型,与溶剂对照组比较,B ap染毒组大鼠精子DNA碎片指数显著升高,差异有统计学意义,益肾通络方组的大鼠精子DNA碎片率均低于Bap染毒组,差异有统计学意义。2.高通量测序结果显示:溶剂对照组和益肾通络方组得到的差异表达lncRNA共有195个,其中146个lncRNA表达上升,49个lncRNA表达下降,差异表达m RNA共有290个,其中162个m RNA表达上升,128个m R NA表达下降;溶剂对照组与Bap染毒组得到的差异表达lncRNA共有72个,其中36个表达上升,36个表达下降,差异表达m RNA共有199个,其中93个表达上升,106个表达下降;Bap染毒组和益肾通络方组得到的差异表达lncRNA共有398个,其中304个表达上升,94个表达下降,差异表达m RNA共有631个,其中340个表达上升,291个表达下降。3.lncRNA和m RNA关联分析结果显示:差异基因在细胞组分方面,主要有细胞类别、细胞器类别、细胞部分类别、以及细胞器部分类别;在参与生物过程方面,基因显著富集于细胞过程类别,单组织过程类别和代谢过程类别;在分子功能方面,主要有结合分子功能类别和催化活性功能类别。Cis作用靶基因主要的通路有细胞粘附分子、MAPK信号通路、胞吞作用、细胞因子与细胞因子受体的相互作用等;trans作用靶基因主要的通路有神经活性配体-受体相互作用、细胞因子与细胞因子受体的相互作用以及嗅觉传导等。结论:1.益肾通络方能够降低大鼠精子DNA碎片率,对大鼠精子DNA损伤有一定的防护作用。2.Bap染毒大鼠精子DNA损伤所涉及到的主要生物途径为细胞过程类别、细胞类别、细胞部分类别、结合分子功能类别;主要通路为细胞粘附分子、MAPK信号通路、胞吞作用、细胞因子与细胞因子受体的相互作用、神经活性配体-受体相互作用、嗅觉传导等,lncRNA可能通过以上生物途径和信号通路对Bap染毒大鼠精子DNA损伤发挥调控作用。
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