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目前,以C亚型为主的HIV-1仍然在世界上广泛流行,迫切需要研制出安全有效的艾滋病疫苗,进而需要合适的艾滋病动物模型对疫苗进行评价。C亚型SHIV和相应非人灵长类模型是研究HIV-1感染和发病机制及评价以C亚型env区为靶点的候选疫苗功效的有效工具。为了建立合适的C亚型SHIV动物模型进行候选疫苗评价,本研究选择了R. M.Ruprecht教授构建的SHIV-1157ipd3N4,这株SHIV编码HIV-1 C亚型env基因,具有高度复制能力和单一CCR5辅助受体嗜性,能够粘膜途径感染恒河猴并诱发AIDS类似症状,而且感染猴缓慢的疾病进程与人类感染HIV-1相似。本研究首先制备了SHIV-1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株,发现其序列与SHIV-1157ipd3N4克隆株的相似度为99%。随后,为了向后续动物模型接种剂量提供参考,又对SHIV-1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株和印度恒河猴细胞适应株进行了细胞水平评价,结果前者病毒浓度为500TCID50/ml,而后者为1000TCID50/ml。模拟血液传播和性传播方式建立SHIV-1157ipd3N4/中国恒河猴模型能够反映艾滋病的传播方式,本研究分别应用SHIV-1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株静脉和直肠途径感染中国恒河猴,SHIV-1157ipd3N4印度恒河猴细胞适应株阴道途径感染中国恒河猴。同时为了更好的反映HIV在人群中自然传播方式,直肠和阴道途径模型使用了小剂量多次的感染方式。结果SHIV-1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株能够通过静脉和直肠途径成功感染中国恒河猴,而SHIV-1157ipd3N4印度恒河猴细胞适应株也成功地通过阴道途径感染中国恒河猴,建立了三种途径的SHIV-1157ipd3N4/中国恒河猴模型。随后,本研究比较了不同感染途径动物模型间的生物学特性、易感性和发病规律。结果发现三种途径建立的SHIV-1157ipd3N4/中国恒河猴模型生物学特性存在差异。血浆病毒RNA载量方面,静脉组感染猴在21d时出现峰值后迅速下降进入平台期,而直肠组和阴道组感染猴血浆病毒RNA载量阳转时间和峰值时间各不相同,部分感染猴的峰值不明显,全部小剂量感染结束后逐渐进入平台期；外周血CD4+/CD8+T淋巴细胞比值方面,静脉组感染猴21d时均出现下降,随后迅速恢复正常,而直肠组和阴道组感染猴的比值在小剂量多次感染过程中呈现多次小幅度波动,部分猴出现明显下降过程,三组感染猴的比值随着感染时间延长总体上逐渐下降；静脉组和直肠组在整个感染过程中外周血CD4+T淋巴细胞绝对数逐渐上升而阴道组基本保持稳定；三组感染猴血浆结合抗体滴度稳定上升,后期静脉组明显高于直肠组和阴道组。中国恒河猴三种途径对SHIV-1157ipd3N4的易感性不同,静脉途径接种50 TCID50和5 TCID50SHIV-1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株能够成功感染,而0.5 TCID50和0.05 TCID50未感染。直肠和阴道途径分别小剂量接种13次和11次后使实验猴全部感染。至感染后49w止,所有感染猴都未出现明显类似艾滋病的临床症状。另外,为了揭示艾滋病病毒的变异规律,本研究又进一步对SHIV-1157ipd3N4经不同途径感染中国恒河猴后的变异趋势进行了探索。发现短期内从感染猴血浆中扩增出的gp120碱基和氨基酸序列只存在少数位点的改变,没有N糖基化位点的变化,也没有出现明显变异趋势。在制备病毒株的过程中,为了证明HIV-1 p24 ELISA试剂盒检测SIV p27抗原结果的可靠性,本研究比较了HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒对病毒液和血浆中SIV p27抗原检测结果。结果显示HIV-1p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV p27抗原的灵敏度分别是150pg/mL和62.5 pg/mL;两种试剂盒检测病毒液和血浆中SIV p27抗原的定性结果一致；定量结果的统计分析得出病毒液的直线回归决定系数R2=0.857,直线相关系数r=0.926,P<0.01；血浆的直线回归决定系数R2=0.512,直线相关系数r=0.716,P<0.05。综上所述,本课题首先制备了SHIV-1157ipd3N4中国恒河猴细胞适应株,然后模拟人类自然感染HIV方式和三种主要感染途径分别建立了静脉、直肠和阴道途径SHIV-1157ipd3N4/中国恒河猴模型,并比较不同感染途径动物模型间的生物学特性、易感染性和发病规律,进一步对病毒经不同途径感染中国恒河猴后的变异趋势进行了探索,另外比较了HIV-1 p24和SIV p27两种ELISA试剂盒检测SIV P27抗原结果。这些研究为揭示HIV-1感染和发病机制提供了参考,并为以C亚型env区为靶点的候选疫苗评价提供了有效工具。