青田、金华田鱼生化成分分析及水通道蛋白1 cDNA克隆和表达的研究

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田鱼是我国浙南地区的养殖性鱼类,具有悠久的稻田养殖历史。其中青田地区的稻鱼共生系统于2005年被联合国粮食农业组织(FAO)批准并被列入首批全球重要农业文化遗产(Globally Important Agricultural Heritage System,GIAHS)保护名录,是浙南稻田养殖田鱼的核心区域。田鱼在稻田环境中经长期的人工选育和在稻田环境中长时间的自然演化,具有多种独特的形态结构和性状特征。这其中,有学者发现田鱼的鳞片有软鳞、硬鳞之分,青田地区范围内以软鳞田鱼为主,而金华地区的田鱼却以硬鳞为主。本文选取浙江省青田、金华两个地区的田鱼为研究材料,通过比较两个区域田鱼的肌肉营养成分、组织含水量以及水通道蛋白1组织表达水平,并结合不同养殖模式对田鱼肌肉品质的影响研究,旨在找到青田、金华田鱼除鳞片差异之外的其他差异特征,为今后进一步揭示两地鳞片差异的成因提供证据和参考。具体研究内容如下:1青田、金华田鱼肌肉营养成分的比较研究。比较分析了青田、金华田鱼肌肉的常规营养成分,矿物元素,氨基酸和脂肪酸组成。结果表明:青田田鱼粗脂肪、水分含量显著高于金华田鱼;两种田鱼中均测得常见氨基酸17种,除甘氨酸和胱氨酸外,金华田鱼各氨基酸含量均显著高于青田田鱼;根据氨基酸评分(AAS),青田田鱼的第一、二限制氨基酸分别为缬氨酸和蛋氨酸+半胱氨酸,金华田鱼的第一、二限制氨基酸分别为蛋氨酸+半胱氨酸和缬氨酸;在两种田鱼中共测得16种脂肪酸,其中青田田鱼的C16:1(棕榈油酸)、C18:1n9c(油酸)、C18:3n3(α-亚油酸)含量显著高于金华田鱼,且青田田鱼的单不饱和脂肪酸含量显著高于金华田鱼,金华田鱼的C18:0(硬脂酸)和C20:4n6(花生四烯酸)含量显著高于青田田鱼;在矿物元素中,青田田鱼的锌、铜含量显著高于金华田鱼;金华田鱼的钙、磷、镁含量显著高于青田田鱼。2.不同养殖模式田鱼肌肉营养成分分析设置6组不同养殖模式的试验组,比较各组田鱼肌肉的常规营养成分、矿物元素、氨基酸和脂肪酸组成。稻田养殖模式中田鱼肌肉粗脂肪含量显著高于池塘养殖模式;在6个处理组田鱼肌肉中均测得常见氨基酸17种,池塘养殖组(F组)田鱼的组氨酸含量显著低于其他各组;稻田投放化肥组(E组)田鱼肌肉的单不饱和脂肪酸含量显著高于F组、棕榈酸(C16:0)含量显著低于其他各组,F组的花生四烯酸(C20:4n6)和二十二碳六烯酸(C22:6n3)含量显著高于其他各组;稻田空白组(A组)和F组钙元素含量显著高于其他各组。F组镁元素含量显著高于稻田投放有机肥高密度组(C组),稻田投放有机肥低密度组(B组)的锌和硒含量均为最高,显著高于F组。3青田、金华田鱼组织含水量差异比较研究比较分析青田、金华两个地区的田鱼组织含水量,继而利用低场核磁共振技术两地区田鱼的肌肉、鳞片和鳃组织中的水分构成进行比较,结果表明:青田区田鱼鳃和肌肉含水量显著高于金华地区,金华地区田鱼鳞片的含水量显著高于青田地区;青田、金华田鱼鳃、肌肉和鳞片各种状态水的分布和含量均表现出较大差异,青田田鱼肌肉结合水比例高于金华田鱼。4.青田、金华田鱼水通道蛋白1的分子克隆和表达分析采用RACE技术分别获得的青田、金华田鱼AQP1的cDNA全长序列,并就其组织表达展开分析。青田田鱼AQP1全长cDNA序列1197bp,其中5’端UTR为66bp,3’端UTR为351bp,开放阅读框为780bp,共编码259个氨基酸,理论等电点为5.77,蛋白分子量为27.2kDa;金华田鱼AQP1全长1221bp,其中5’端UTR为66bp,开放阅读框为780bp,编码259个氨基酸,3’端UTR为375bp。金华田鱼AQP1全长1221bp,其中5’端UTR为66bp,开放阅读框为780bp,编码259个氨基酸,3’端UTR为375bp,理论等电点为6.13,蛋白分子量为27.3kDa;均包含6个跨膜结构域。AQP1组织表达结果表明:AQP1在田鱼眼中相对表达量最高,两地区具有显著差异。
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