Pseudomonas sp.DS0601-fx菌株的选育及其PCL解聚酶酶学性质的研究

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聚已内酯(Poly—Caprolactone,PCL),一种可完全降解的半结晶型脂肪族聚酯,近来在医药、农业、环保等方面获得广泛的关注。但其生物降解性研究目前报道较少。 本论文通过采集活性污泥样品,并进行分离、筛选,获得一株可高效降解PCL的细菌菌株DSO601—fx。通过菌株和菌落的形态学观察以及菌株的生理生化特性试验和16SrDNA序列分析比对,初步鉴定该菌株属于假单胞菌属(Pseudomonassp.)。 在以PCL为唯一碳源的培养基中培养菌株DSO601—fx,对其生长规律、PCL粉末和PCL膜的降解行为进行观察研究,发现DSO601—fx可以在70h以内将PCL膜完全降解,其降解速率趋势与菌株生长趋势趋于一致。 对PCL粉末为唯一碳源的液体培养基进行了优化,发现用PCL粉末培养90h后菌株可以分泌大量蛋白,蛋白具有对PCL的降解能力,对DSO601—fx菌株产生的PCL解聚酶进行进一步分离纯化,通过SephacrylS-100层析后分离出一种PCL解聚酶。酶的比活力达到900.24u/mg,纯化倍数为14.24,酶活回收率为2.64%。 对PCL膜降解的SEM照片进行观察,发现解聚酶引起的PCL膜降解存在一定规律,即由表层平面降解到深层立体降解;从非结晶区快速降解到结晶区缓慢降解。 菌株DSO601—fx不仅可以在PCL唯一碳源培养基中良好生长,也可以在其他生物可降解材料PHB和PLA培养基中稳定生长并分泌相应的解聚酶。
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