烟草马铃薯Y病毒病生防细菌的筛选及其作用机理研究

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烟草是重要的农业经济作物,马铃薯Y病毒(Potato virus Y,PVY)在湖南烟区逐年加重,常零星爆发,在降低烟叶产量的同时,还严重降低考烟品质。本研究以烟草PVY为研究对象,从烟田土壤中分离筛选生防菌株,通过形态鉴定、生理生化特性和分子生物学特性研究确定其分类地位,探索其发酵条件,进行大田生物防治试验,并通过全基因组测序分析其活性代谢产物,初步探究其作用机理,研究结果如下:1.首先通过分离纯化,从烟草根际土壤中得到124株细菌菌株。利用半叶枯斑法,筛选得到5株对PVY抑制率在95%以上的活性菌株,其中D3-1对PVY的平均抑制率为99.71%。2.对菌株D3-1进行形态观察、生理生化特性测试、16S r DNA序列比对,鉴定拮抗菌株D3-1为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus evelzensis)。3.采用单因素试验优化D3-1发酵条件,菌株D3-1对PVY拮抗活性最佳的发酵条件为LB培养基,p H 7.0左右,最适合接种量1.5%,最佳发酵温度30℃,转速180r/min,最佳发酵时间72h。4.利用不同温度、PH、紫外线照射时间处理发酵液,并通过半叶枯斑法测定D3-1发酵液对PVY的抑制率来探究发酵液中活性物质的稳定性,结果表明,发酵液经60℃处理后对PVY的枯斑抑制率开始下降,在p H 5-9范围内对PVY的枯斑抑制率保持在90%以上,紫外线照射8h后对PVY的枯斑抑制率仍能达到96%。5.田间小区试验验证D3-1生物防治效果,发现人工接种PVY,空白对照区病情指数为32.74,D3-1发酵液处理区病情指数为14.04,D3-1发酵液对PVY的防效达57.12%。6.实时荧光定量PCR试验发现D3-1发酵液处理后的烟株PR1基因表达量远远高于对照组,表明D3-1的代谢产物可以诱导烟株产生系统抗性。7.对D3-1菌株进行基因组测序与分析发现,D3-1染色体基因组上含有12个次生代谢产物合成基因簇,除含有嗜铁素、丰原素和大环内酯等抗菌物质相关基因簇外,D3-1中还含有合成表面活性素的基因簇,可能与抗病毒有关。
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学位
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