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食管癌是世界上最常见的六大恶性肿瘤之一，具有显著的地域性分布差异。其中我国食管癌的发病率和死亡率最高。尽管目前食管癌的诊疗技术不断提高，仍阻挡不了其发病率的逐年上升。因此，进一步研究临床抗肿瘤药物对食管癌的影响及有关信号转导途径的活化，依然是食管癌治疗研究的目标。c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)是丝裂素活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinases, MAPK)超家族成员之一，又称应激激活蛋白激(stress activated protein kinase, SAPKs)。在多种细胞应激（如电离辐射、渗透压、热休克和氧化损伤等）下，可以发生有效磷酸化而激活，转到信号至细胞核，发挥生物学效应（如引起细胞增殖、分化、凋亡等）。目前有研究发现，抑制JNK活化能够抑制肿瘤细胞的恶性增殖和诱导细胞凋亡。蟾毒灵（Bufalin）是从蟾蜍科动物中华大蟾蜍和黑眶蟾蜍的皮肤和耳后腺中提取和分离的有效抗癌成分。以往的研究证明，蟾毒灵在体外对人白血病、肝癌、胃癌以及胰腺癌细胞增殖均有一定的抑制作用，但其抑制肿瘤细胞增殖作用的机制尚不十分清楚。目前有关蟾毒灵对食管癌的影响的研究甚少。本课题采用蟾毒灵作用于食管癌细胞TE13，检测其对细胞增殖的抑制和JNK蛋白表达及活（P-JNK）水平的影响，旨在探讨蟾毒灵对食管癌细胞的影响以及可能的分子机制，为临床化学治疗提供理论依据。目的：通过蟾毒灵作用于人食管癌细胞株TE13，观察蟾蜍灵对TE13细胞增殖抑制的作用，研究蟾蜍灵对人食管癌细胞株TE13中JNK和P-JNK蛋白表达的影响，分析其抑制增殖的可能机制，为食管癌的发生机制及治疗新靶点提供理论依据。方法：使用不同浓度的Bufalin（0、10、25、50、100nmol/l）处理人食管癌TE13细胞，采用细胞计数法检测各组细胞经不同浓度的Bufalin处理后的浓度变化。采用MTT法检测Bufalin对TE13细胞的增殖抑制作用，并绘制细胞增殖抑制曲线。采用Western blot技术检测JNK和P-JNK蛋白在各组细胞中的表达情况。采用免疫细胞化学法检测JNK和P-JNK蛋白在各组细胞中的定位及表达。最后采用SPSS13.0软件对数据进行统计学处理，P<0.05表示具有统计学的显著差异。结果：1.细胞计数方法检测结果显示：Bufalin对人食管癌TE13细胞株的增殖有明显的抑制作用。经不同浓度的Bufalin处理细胞24h后，其各组的细胞浓度：（4.35±0.10）×10~5、（4.08±0.06）×10~5、（3.7±0.09）×10~5、（2.7±0.07）×10~5、（2.35±0.09）×10~5个细胞/ml，随药物浓度的增加而降低,差异有统计学意义（P<0.01）。Bufalin可以抑制人食管癌TE13细胞的增殖，且呈剂量依赖方式。2.MTT检测结果显示：Bufalin对人食管癌TE13细胞株有明显的增殖抑制作用。不同浓度的Bufalin分别作用食管癌TE13细胞24h、48h及72h，其吸光值（24h:1.004±0.025、0.869±0.012、0.735±0.013、0.562±0.025、0.462±0.021；48h:1.004±0.014、0.760±0.020、0.645±0.010、0.475±0.021、0.356±0.027；72h:1.001±0.011、0.668±0.024、0.538±0.021、0.413±0.032、0.237±0.037）在同一时间下随着浓度的增加而逐渐减小，差异有统计学意义(P<0.01)。在同一浓度下随时间的增加其吸光值也逐渐下降，差异有统计学意义（P<0.01）。Bufalin对TE13细胞增殖抑制作用随药物浓度和作用时间的增加而增强，呈时间-剂量依赖方式。3.Western blotting结果显示：经不同浓度Bufalin处理过的食管癌TE13细胞株，JNK表达水平无明显变化,各组细胞JNK平均相对表达量分别为（0.786±0.005；0.776±0.005；0.779±0.016；0.792±0.015；0.769±0.014），差异均无统计学意义（P>0.05）；而P-JNK的表达水平明显降低，各组细胞P-JNK平均相对表达量分别为（0.740±0.007；0.687±0.006；0.662±0.005；0.587±0.007；0.394±0.012），差异均有统计学意义（P<0.01）。且各组细胞P-JNK的表达水平随Bufalin浓度的增大而逐渐降低，呈现剂量依赖关系。4.细胞免疫化学结果显示：镜下观察JNK阳性表达定位于胞浆，P-JNK阳性表达定位于胞浆和胞核，以细胞浆和（或）细胞核中出现棕黄色颗粒或团块者为阳性细胞。不同浓度Bufalin处理食管癌TE13细胞，JNK阳性表达细胞的平均百分率无明显变化（84.44%；85.95%；83.85%；84.16%；84.03%），P>0.05，差异无统计学意义。P-JNK的阳性表达细胞的平均百分率（85.30%；80.52%；72.85%；62.16%；40.03%）随着Bufalin浓度的增大而逐渐降低，P<0.01，差异有统计学意义，呈剂量依赖关系。结论：1.蟾毒灵可以显著抑制人食管癌TE13细胞株的增殖，且抑制作用呈现时间和剂量依赖关系。2.抑制JNK的激活降低P-JNK表达水平可能是Bufalin抑制人食管癌细胞增殖的机制之一。