目的：迟发性脑血管痉挛（DCVS）是动脉瘤性蛛网膜下腔出血（SAH）后致死、致残的主要原因。业已表明，SAH后炎性细胞因子在痉挛动脉中表达的增加，可使动脉壁出现以中性粒细胞为主的炎症细胞浸润，从而导致持续性脑血管痉挛。核因子-κB（nuclear factor kappa B,NF-κB）是众多细胞因子和炎症介质表达的主要转录因子之一， NF-κB的活化可使ICAM-1、TNF-a和IL-1等促炎性因子基因大量表达。我们新近的研究证实家兔SAH时NF-κB在痉挛的基底动脉表达增高，但是否伴有TNF-a促炎性因子的表达变化尚未证实。为此，本研究拟采用兔枕大池二次注血模型，应用免疫组化和免疫蛋白印迹法观察家兔痉挛的基底动脉中NF-кB和TNF-a活性表达变化，同时应用枕大池注射外源性CCK-8，评价其对SAH后迟发性脑血管痉挛预防作用机制，为治疗动脉瘤性SAH后DCVS提供新的思路。 方法：中国白兔64只，雌雄不限，体重1.5~2.0kg，随机分为四组：①假手术组（n=8）：仅进行枕大池假穿刺和假注血；②SAH组（n=24）：分别在Day0和Day2经家兔枕大池二次注射自体动脉血（1ml/kg）制作二次SAH模型，并在Day4天（第一次注血后4天）、Day7和Day14分三批处死动物，每批8只；③CCK-8治疗组（n=24）：枕大池注<WP=4>入CCK-8，每日一次。按剂量不同分为1μg/kg、4μg/kg和8μg/kg三个亚组（各8只），第一次注血后Day7处死。④生理盐水组（n=8）：用等量37℃生理盐水代替CCK-8，第一次注血后Day7处死。半数动物经麻醉后开胸经主动脉灌注Hanks平衡液 pH7.4 37℃ 300ml后，再用2% 多聚甲醛 Hanks 平衡液 pH 7.4 37℃ 200ml处死, 迅速开颅取出包括基底动脉在内的脑干及脑组织，置4%多聚甲醛溶液中常温下再固定24小时，供组织学、免疫组化检查及管径测量研究；另一半实验动物用氯胺酮静脉麻醉后（50mg/kg）断头处死，将剥离下的基底动脉迅速放入液氮中2分钟，再置-70℃冰箱保存以备Western Blot检测。采用华东理工大学自动化所细胞免疫组织化学分析系统Version 2.0自动分析仪记录阳性细胞百分率。各组数据均用均数加减标准差（±s）表示。应用AlphalmagerTM 1220 Documentation & Analysis system V5.50对免疫蛋白印迹结果进行定量分析，其面积灰度值以积分光密度值（internal optical density,IOD）表示，记录实验结果。应用SPSS10.0软件包进行统计处理。两样本均数间的比较用t检验；多样本均数间的比较用单因素方差分析,以P<0.05为有显著差异。结果: 1、组织学观察结果：假手术组动物基底动脉组织结构正常。SAH组动物 在day4、 day7时，其基底动脉均出现不同程度管径变窄，管壁增厚，内膜出现皱折 （Table1，Fig1），day7时管腔狭窄程度更为明显。应用CCK治疗组的动物的血管痉挛程度有明显缓解，不但与剂量的大<WP=5>小相关（Fig1），而且在day7时动脉痉挛改善程度最为显著，而生理盐水组痉挛血管无好转(Table-2，Fig1, P>0.05)。2、免疫组化观察结果：假手术组动物基底动脉血管内皮细胞、平滑肌细胞和外膜细胞均有少量NF-κB、TNF-a表达，NF-κB表达局限在胞浆内和胞核内（Fig2），TNF-a则局限在血管内皮细胞、平滑肌细胞和外膜细胞的胞浆内（Table-3, Fig3）。 SAH组动物于注血后day4 ，其基底动脉血管内皮细胞、平滑肌细胞和外膜细胞NF-κB、TNF-a表达开始增加，day7达到高峰，day14下降至正常水平（Table-3）。应用CCK-8治疗组动物NF-κB、TNF-a表达明显减弱并存在剂量依赖性，与SAH组、生理盐水组在day7时比较有显著差异（Table-4, P<0.01）。3、免疫蛋白印记结果（Fig4、5）：假手术组NF-κB、TNF-a的IOD值分别为1354±583和1236±573， SAH组动物day4, day7，day14时，NF-κB、TNF-a的IOD值分别为3579±214、4326±316，8924±362、11214±649, 1119±685、1036±341，SAH day4, day7时与假手术组比较有显著差异(Table-5, P<0.01), SAH day14时无显著性差异（P> 0.05）。生理盐水治疗组day7时NF-κB、TNF-a的IOD值分别为9237±614、10993±626，与SAH组比较无显著差异，但是CCK-8治疗组NF-κB、TNF-a的IOD值明显下降并存在剂量依赖性，与SAH组day7和生理盐水治疗组比较有显著差异（Table-6，P<0.01）。结论: 本文结果表明细胞介导的炎症反应在DCVS中起着重要作用，外源性CCK-8可通过抑制NF-κB的转录减少其靶基因的合成，使TNF-α炎性因子表达降低，从而<WP=6>改善迟发性脑血管痉挛的程度，呈现极具潜力防治DCVS的药理作用。