基于新型材料电化学发光及多种信号放大策略的生物分析新方法研究

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电化学发光(ECL)已逐渐发展成为一种强大的分析技术,应用于生物分析、环境检测、发光设备和成像等方面。ECL技术在大量免疫分析的临床诊断中成功商业化,如心脏病、病毒感染、肿瘤标志物等。本文利用新型材料并结合多功能DNA结构成功构建了性能良好的一系列电化学发光生物传感器,应用于Cd2+、Mg2+、BRCA1、CEA的高灵敏检测。本文将研究工作分为以下两个部分:1.本工作组装了一种多功能信号探针DNA网络结构(DNA Net),该探针负载Ru(phen)32+和Ag纳米团簇(Ag NCs),并与铽有机凝胶结合,设计了一种多功能电化学发光(ECL)传感器,用于Cd2+和Mg2+的双电位“开”“关”检测。首先,Cd2+(第一靶标)驱动的DNA walker循环产生大量的输出DNA,用于将具有Ru(phen)32+和富C碱基的多功能DNA网络(DNA Net)结构探针连接到铽有机凝胶(TOG)修饰的电极上。由此产生了Ru(phen)32+的正电位ECL信号,Ag NCs通过共振能量转移和共反应物竞争同时猝灭了TOG的负电位ECL信号,实现了Cd2+信号“开”和“关”检测。此外,第二靶标Mg2+特异性剪切电极上的DNA酶底物,释放出带有Ru(phen)32+和Ag NCs的DNA网络探针,实现双电位信号对Mg2+的“开”和“关”检测。该策略利用双电位ECL探针和新颖的DNA网络结构开发了一种新型多功能生物传感器,并利用双“开”“关”信号为多靶标检测开辟了一条新途径,在实际检测中显示出巨大的潜力。并将该多功能传感器成功应用于大米中Cd2+的检测。2.本工作是基于新型苝二亚胺(PDI)-金属有机框架(IRMOF-3)电化学发光能量转移增强DNA纳米花-Cd S QDs信号探针,并利用DNA步行器多重放大技术,构建了新型双电位比率型ECL生物传感器检测乳腺癌基因和癌胚抗原双目标。首先通过电化学还原将氧化石墨烯修饰到电极上,再通过π-π共轭修饰发光材料PDI@IRMOF-3复合物,之后滴加一层金纳米颗粒,将DNA探针以及猝灭剂多巴胺(DA)修饰到电极表面,获得一个较低的初始ECL信号背景。当目标一乳腺癌基因(BRCA1)存在时,BRCA1与DNA发夹杂交形成双足DNA步行器,该步行器与探针结合使得DA远离电极表面,PDI在-0.25 V的ECL信号恢复。镁离子驱动DNA酶识别切割活性位点,剪切Prober探针,释放双足步行器在电极上游走获得更高的信号放大,检测BRCA1。当目标物二癌胚抗原CEA存在下,通过燃料分子驱动链置换反应进行循环放大产出大量output DNA,将DNA纳米花-Cd S QDs信号探针连接到电极上,金属有机骨架IRMOF-3可以将自身的激发能量以非辐射的方式转移到基台的半导体量子点Cd S QDs中去,从而增加了Cd S QDs在-1.5 V处的ECL发光信号。在-1.5 V处Cd S QDs的信号变化和-0.25 V处基本不变的PDI的ECL信号的比值达到检测CEA的目的。该工作不需要更换共反应剂,简化了检测步骤,同时也能防止单信号所引起的假阳性错误。为早期的肿瘤筛查提供了一种新的检测办法。
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