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目的:胃癌仍然是世界范围内的一项严峻的公共健康问题。近年来,其发病率及死亡率居高不下,尤其在中国、日本及韩国为主的亚洲地区,其死亡率常居恶性肿瘤前列。尽管胃镜检测技术的革新提高了早期胃癌的诊断率,但多数患者确诊时已发展为进展期胃癌。目前以手术为主、辅以术后化疗的综合性治疗对进一步提高患者生存获益非常有限,亟需探索新的分子靶点。目前已知的胃癌最强致病因子为幽门螺旋杆菌,其被世界卫生组织定义为I类致癌物,并参与约90%的胃非贲门癌的致病过程。越来越多的研究显示幽门螺旋杆菌通过遗传学及表观遗传学修饰激活促癌基因和（或）抑制抑癌基因而促进胃癌的发生发展。幽门螺旋杆菌也可通过直接或间接激活转录因子,如NF-κB,STAT3及β-catenin等,进一步转录调控下游基因的表达,对胃癌形成、转移、耐药及维持干细胞特性等方面发挥重要作用。RAS蛋白激活样因子2（RAS protein activator like 2,RASAL2）属于RAS GTPase激活蛋白家族成员,在多种恶性肿瘤中扮演着重要且不同的角色,而在胃癌中的作用及分子机制尚未被阐明。本研究旨在明确幽门螺旋杆菌介导的RASAL2在胃癌形成中的作用及其分子机制,为研发胃癌新治疗策略提供更多理论依据。方法:1.收集36例人胃癌组织及其癌旁组织并送高通量RNA测序,另收集10例Tff1敲除小鼠胃组织（5例幽门螺旋杆菌感染,5例未感染）并送高通量RNA测序。分析各数据集显著差异基因并取交集,获得可能调控幽门螺旋杆菌致癌的关键基因RASAL2。并通过TCGA及GEO公共数据集验证其表达情况。2.采用体外幽门螺旋杆菌感染胃癌细胞模型,染色质免疫共沉淀技术（Ch IP）及荧光素酶实验探索幽门螺旋杆菌转录调控RASAL2表达。3.采用GO通路富集分析预测RASAL2在胃癌中发挥的生物学作用,并采用体外模型（球体成形实验和类器官实验）及体内实验验证其生物学功能。4.采用基因集富集分析（GSEA）预测RASAL2下游信号通路,并通过q RT-PCR和Western Blotting等技术结合体外幽门螺旋杆菌感染模型验证RASAL2下游调控机制。5.收集本中心365例胃癌组织芯片,采用免疫组化检测RASAL2表达,结合临床病例特征、辅助化疗信息及预后信息分析其对化疗敏感性及预后预测的作用。结果:1.分析本中心及公共数据集显示,RASAL2在胃癌组织中的表达水平显著高于癌旁组织（均P<0.05）。2.体外幽门螺旋杆菌感染模型显示,幽门螺旋杆菌感染上调RASAL2m RNA及蛋白表达。采用TNFα（或过表达p65）处理促进、而BAY11-7082处理抑制RASAL2m RNA及蛋白表达。Ch IP结果显示NF-κB直接结合RASAL2启动子区域。荧光素酶实验显示NF-κB激活RASAL2启动子转录活性。3.MNK28及MNK45细胞系中稳定沉默RASAL2后,其球体直径（P<0.01）及球体形成数量显著降低（P<0.05）。在人胃癌来源的类器官中稳定沉默RASAL2后,类器官直径（P<0.01）及数量（P<0.05）显著下调。裸鼠皮下成瘤模型中进一步证实沉默RASAL2显著抑制皮下肿瘤形成能力量（P<0.001）。4.通过使用基因沉默和瞬时过表达,我们发现RASAL2以AKT/GSK-3β依赖性方式上调了β-catenin转录活性,RASAL2耗竭或AKT抑制剂消除了幽门螺旋杆菌感染引起的β-catenin的磷酸化和核易位。为了研究潜在的机制,我们揭示了RASAL2结合蛋白磷酸酶2A（PP2A）,抑制PP2A激酶活性,并进一步激活AKT/GSK-3β/β-catenin轴。5.胃癌组织芯片免疫组化结果显示胃癌组织RASAL2蛋白阳性表达率显著高于癌旁组织。多因素分析显示患者年龄、肿瘤部位、AJCC分期及RASAL2表达情况是胃癌总生存率的独立预后因素。临床病理分析显示人胃肿瘤中RASAL2的异常过表达与不良预后和辅助化疗耐药有关。结论:1.胃癌RASAL2过表达与不良预后和辅助化疗耐药密切相关,有望作为预测胃癌预后与化疗敏感性的新靶标。2.幽门螺旋杆菌通过NF-κB直接结合RASAL2启动子区域并转录调控RASAL2表达。3.RASAL2在促进胃癌形成中发挥重要作用。4.RASAL2结合并抑制PP2A激酶活性,并进一步激活AKT/GSK-3β/β-catenin轴。