第一部分：血小板衍化生长因子基因活化材料的制备及生物活性检测目的：构建含有人血小板衍化生长因子-B (hPDGF-B)基因片段的真核表达质粒,并利用兔成纤维细胞做生物活性检测。方法：应用基因重组技术和限制性内切酶双酶切构建并鉴定EGFP-N1-hPDGF-B真核表达载体,体外培养兔成纤维细胞,传代培养后用阳离子脂质体(LipofectAMINE):EGFP-N1-hPDGF-B为3uL：1μg的比例转染,G418筛选获得稳定转染的细胞。通过RT-PCR和荧光法检测PDGF-B表达水平；利用四甲基偶氮唑法检测PDGF-B的生物学活性绘制成纤维细胞生长曲线。结果：成功构建含EGFP-N1-PDGF-B基因的真核表达载体,经RT-PCR检测了PDGF-B在转录水平mRNA的表达情况,荧光法检测目标基因成功转染至靶细胞,转染后的成纤维细胞呈强阳性表达,并持续4周以上。结论：重组真核表达载体构建正确,并能在成纤维细胞中表达PDGF-B mRNA, PDGF-B基因转染可使成纤维细胞有效而稳定的表达活性PDGF-B而产生生物效应。对成纤维细胞有明显的促进生长作用。第二部分：血小板衍化生长因子基因活化材料在体实验研究的组织学分析目的：利用光镜和透射电镜等组织形态学观察手段,比较实验组与对照组在重建愈合过程中胶原表达情况和重建细胞显微结构的差异,以评价脂质体与携带血小板衍化生长因子基因片段的合成质粒共同构成的基因转染系统在兔前交叉韧带重建动物模型中对移植物愈合的促进作用。方法：成年新西兰兔48只,随机分为实验组和对照组。取半腱肌肌腱替代前交叉韧带制备重建动物模型,实验组在重建部位给予基因转染材料,对照组给予盐水。术后1个月,3个月和6个月,取出重建前交叉韧带标本,对其进行光学显微镜和电镜观察,比较胶原表达和细胞超微结构的变化。结果：光镜下观察发现,在不同时期,实验组的成纤维细胞数量、胶原含量、胶原纤维的直径以及胶原纤维的排列均好于对照组,实验组标本组织形态在6月时已十分接近正常前交叉韧带组织结构。电镜观察见各时期实验组的细胞增生现象比对照组活跃,提示修复细胞代谢更旺盛,纤维间隙内有较多基质成分,胞质中可见较为丰富的内质网结构和线粒体。结论：PDGF生长因子基因转染的重建韧带组织结构愈合好于对照组,提示以脂质体为载体携带PDGF-B基因的质粒在重建前交叉韧带愈合局部具有良好的原位转染生物学效能。具有一定的实际应用前景。第三部分血小板衍化生长因子基因活化材料在体实验生物力学测试目的：观察脂质体-PDGF-B基因转染系统对兔半腱肌肌腱替代前交叉韧带动物模型中重建韧带愈合强度的促进作用。方法：成年新西兰兔48只,随机分为实验组和对照组。取半腱肌肌腱替代前交叉韧带制备重建动物模型,实验组在重建部位给予基因转染材料,对照组给予盐水。术后1个月,3个月和6个月,取出重建前交叉韧带标本,对其作生物力学测试,记录最大断裂负荷(极限负荷)、断裂时最大拉伸位移,应力、应变及刚度,并作出以上数据随时间变化的关系图谱。结果：1.实验标本大体观察无异常,对照组重建韧带断裂1例,实验组未发现重建韧带断裂,动物模型重建手术总体成功率为97.9%。2.术后1个月时,两组标本的各项力学指标无显著性差异。术后第3月和第6月时,实验组重建韧带的最大断裂负荷和弹性模量两项性能显著大于对照组,p≤0.05,但两组的其它力学指标无显著性差异。结论：脂质体-PDGF基因转染系统对兔重建前交叉韧带愈合有明显的正性促进作用,可以有效提高韧带移植物在重建塑性过程中的生物力学性能。