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白细胞介素-10(IL-10)和白细胞介素-16(IL-16)是重要的多效细胞因子,在特异性和非特异性免疫中发挥着重要作用。本研究以我国重要的海水养殖鱼类斜带石斑鱼为对象,利用同源克隆以及RACE技术获得了斜带石斑鱼IL-10基因cDNA全长,为1104 bp,其ORF为564 bp,编码187个氨基酸,预测蛋白分子量为21.7 kDa,等电点为5.74,含有信号肽,无跨膜区。基于IL-10蛋白氨基酸同源性及进化分析显示,斜带石斑鱼与吉富罗非鱼(Oreochromis niloticus)亲缘关系较近,表明所获得的序列是斜带石斑鱼IL-10基因。根据GenBank已登录的基因片段,利用同源克隆和RACE技术获得了斜带石斑鱼IL-16基因cDNA序列,全长为2859 bp,其ORF为1896 bp,编码631个氨基酸,预测蛋白分子量为68.2 kDa,理论等电点为5.36,无信号肽,无跨膜区。基于IL-16氨基酸序列的进化分析表明斜带石斑鱼与大黄鱼(Larimichthys crocea)亲缘关系较近,说明所获得的序列是斜带石斑鱼IL-16基因。利用双酶切和质粒重组技术构建了重组基因原核表达载体pET32-IL-10和pET32-IL-16质粒,成功表达了重组蛋白IL-10和IL-16。经优化表达条件,IPTG浓度为0.02 mmol/L、37°C诱导3 h为IL-10重组蛋白表达最佳条件;IPTG浓度为0.2mmol/L、37°C诱导7 h为IL-16重组蛋白表达最佳条件。运用Real-Time PCR技术,分析斜带石斑鱼IL-10和IL-16基因在健康石斑鱼各组织的表达,同时,分析在灭活哈维氏弧菌刺激后,斜带石斑鱼IL-10和IL-16基因在鳃、胸腺、头肾、体肾、肠、肝、脾和脑的表达差异以及其随时间变化的差异表达。结果显示,在健康斜带石斑鱼体内,IL-10主要在鳃中表达,其他组织中的表达量比较低。经灭活哈维氏弧菌刺激3 h后,IL-10在头肾、体肾、肠、肝、脾和脑中的表达均发生上调。IL-10在免疫后随时间差异表达研究表明,在刺激后6 h时,头肾和体肾到达峰值,鳃和脾达到峰值是12 h,随后迅速回落。IL-16在健康石斑鱼组织中均表达,灭活哈维氏弧菌刺激3 h后除胸腺表达上调外,其余组织均有所下调。IL-16在免疫后随时间差异表达研究显示,IL-16在鳃的表达波动不大,而在脾组织中,在刺激后12 h时达到峰值,随后回落。