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猪瘟是危害养猪业的主要传染病，为了得到大量的猪瘟病毒特异性诊断抗原，并试图在真核细胞中大量表达猪瘟病毒特有的免疫保护性抗原，即E2囊膜糖蛋白，为进一步制备猪瘟亚单位疫苗有效预防本病奠定基础。本试验首次克隆了我国地方分离株HL-LY E2囊膜糖蛋白基因，将该基因整合到毕赤酵母表达系统，使该基因获得了高效表达，并在此基础上探索了不同外界条件对表达量的影响，主要结果如下： 根据基因库已发表的猪瘟病毒E2基因序列及毕赤酵母表达载体pPIC9的多克隆位点序列，利用Oligo和Primer5.0等软件设计并合成一对引物，以提取猪瘟病毒HL-LY株总RNA为模板，应用RT-PCR技术，扩增得到E2基因。将该基因片段先克隆到pMD18-T载体上，并进行了酶切、PCR鉴定和测序分析，阳性重组质粒命名为T-E2。运用DNAMAN软件将测序结果与国内外已发表的猪瘟病毒Alfort株，Brescia株，SHIMEN株，C株，C-V-LZ株，GS-LT株和GS-LX株的E2基因全序列和E2基因主要抗原区序列(23bp～545bp)的核苷酸和氨基酸序列进行了同源性比较，E2基因全序列核苷酸的同源性分别为：99.20％，95.44％，96.51％，95.53％，89.12％，78.66％，78.23％；主要抗原区核苷酸的同源性分别为：98.90％，95.05％，96.70％，96.15％，95.42％，82.42％，83.15％。E2基因全序列氨基酸的同源性分别为：98.93％，95.98％，97.32％，95.71％，89.54％，83.16％，83.42％；主要抗原区氨基酸的同源性分别为：98.35％，95.05％，97.25％，95.60％，95.05％，87.36％，88.46％。结果表明E2基因主要抗原区和全序列均具有较高的保守性，与国内外代表毒株Alfort株，Brescia株，SHIMEN株，C株同源性较高，而与国内其他毒株C-V-LZ株，GS-LT株，GS-LX株同源性较低，说明我国部分地区猪瘟病毒存在E2基因突变株。 将重组质粒T-E2的E2基因酶切后，亚克隆到表达载体pPIC9上，经酶切和PCR鉴定，命名为pPIC9-E2。重组表达载体pPIC9-E2经Sal Ⅰ酶切线性化后，电转化整合到毕赤酵母GS115基因组上，经PCR鉴定和PCR产物测序分析，阳性转化子命名为GS115-pPIC9-E2。 将GS115-pPIC9-E2在30℃条件下振荡培养，以1％的甲醇诱导，猪瘟病毒E2融合蛋白获得了表达，表达量为0.34g／L。表达产物经SDS-PAGE和Western-blot和Dot-ELISA分析，确定其表达的融合蛋白分子量大小为50-54ku，且具有天然蛋白的抗原特异性。 通过对表达条件如pH值、通气量、诱导甲醇终浓度、培养基的选择等条件的探索，可确定猪瘟病毒HL-LY株E2基因表达的理想条件为：最适pH值在4.0～6.0之间，最适培养基为MM培养基，最佳诱导的甲醇终浓度为1％，加大通气量时表达量较好。