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本文主要从以下几个方面进行论述: 第一部分血清尿酸水平与非心源性缺血性卒中的相关性研究 目的: 研究血清尿酸水平与非心源性缺血性卒中的相关性 方法: 本研究对象均来源于广州医科大学附属第二医院2011年1月至2014年4月连续登记在库的缺血性卒中患者。非心源性缺血性卒中入选标准为:(1)按Kidwell分类诊断为“肯定脑卒中患者”;(2)根据缺血性脑卒中TOAST分类标准诊断为LAA和SAA型脑卒中。排除标准:(1)短暂性脑缺血发作、脑出血、脑肿瘤、脑外伤;(2)有严重肾脏和肝脏疾病;(3)自身免疫性疾病史以及白血病、多发性骨髓瘤等明确肿瘤病史。 进展性卒中诊断标准:发病后1周内,神经缺损症状及体征进行性加重;国立卫生研究院卒中量表(National Institutes of Health Stroke Scale,NIHSS)评分增加2分以上,并排除继发性脑出血。 收集的临床资料包括年龄、性别、高血压病、糖尿病、血脂异常、缺血性心脏病、短暂性脑缺血发作(transient ischemic attack,TIA)、卒中史、吸烟、饮酒和家族史。采用尿酸酶—过氧化物酶法检测患者血清尿酸。收集头颅MR、DSA、心脏彩超、颈动脉超声等特殊检查结果,对患者进行TOAST分型。使用开放源图像处理软件OsiriX计算获得急性脑梗死灶体积。收集患者入院NIHSS评分和出院改良Rankin量表(modified Rankin scale,mRS)评分,根据出院时mRS评分对患者进行分组。mRS评分0~2分为预后良好(预后良好组),mRS评分3~6分为顶后不良(预后不良组)。 采用SPSS13.0统计学软件进行数据统计分析,各分析资料缺失率较小,通过个案删除法将存在缺失值的个案删除。计量资料采用Kolmogorov-Smimov检验和Shapiro-Wilk检验进行正态性检验,符合正态分布的计量资料以均数±标准差((X)±S)表示,两组间比较采用独立样本t检验(方差齐)或t(方差不齐)检验,多组间比较采用单因素方差分析;非正态分布计量资料用中位数(Median,M)和四分位数间距(Inter quartile range,IQR)表示,组间比较采用两组或多组秩和检验。计数资料用频数、百分数(%)表示,四格表资料采用四格表卡方检验或四格表Fishers exact检验,多个样本率间的比较采用R×C无序列联表卡方检验或者R×C无序列联表Fishers exact检验。通过单因素和多因素Logistic回归分析评价影响患者预后的因素。按α=0.05的检验水准分析组间各指标之间是否有统计学意义。 结论: 1.急性期血清尿酸是急性缺血性卒中的一种消耗性抗氧化剂,其血清水平与脑梗死体积相关,可作为早期评估非心源性缺血性卒中影像学病变严重程度的指标。 2.UA≤259μmol/L是短期预后不良的独立危险因素。急性期较低血清尿酸水平可能不利于非心源性缺血性卒中患者的短期预后,其机制有待于进一步研究。 3.入院血清尿酸水平与入院病情严重程度和进展卒中没有相关性。 第二部分GLUT-9基因启动子区单核苷酸多态性与非心源性缺血性卒中的相关性研究 目的:研究GLUT-9基因启动子区单核苷酸多态性与非心源性缺血性卒中的相关性 方法: 本研究对象均来源于广州医科大学附属第二医院2012年1月至2014年4月连续登记在库的缺血性卒中患者。非心源性缺血性卒中入选标准为:(1)按Kidwell分类诊断为“肯定脑卒中患者”;(2)根据缺血性脑卒中TOAST分类标准诊断为LAA和SAA型脑卒中。排除标准:(1)短暂性脑缺血发作、脑出血、脑肿瘤、脑外伤;(2)有严重肾脏和肝脏疾病;(3)自身免疫性疾病史以及白血病、多发性骨髓瘤等明确肿瘤病史。根据出院时所评定mRS评分对患者进行分组,mRS评分0~2分为预后良好(预后良好组),mRS评分3~6分为预后不良(预后不良组)。所有患者均对本研究知情同意,并签署知情同意书。 采用尿酸酶—过氧化物酶法检测患者血清尿酸。抽提患者外周血DNA,PCR扩增GLUT-9基因启动子区片段,然后通过DNA测序,筛查获得GLUT-9基因启动子区SNP。利用在线分析软件BDGP: Neural Network Promoter Prediction(http://www.fruitfly.org/seq_tools/promoter.html)对GLUT-9基因5-非翻译区转录起始位点上游序列中可能的核心启动子区进行预测。利用在线分析软件TFSEARCH(http://www.cbrc.jp/research/db/TFSEARCH.html)预测GLUT-9基因启动子区SNP邻近序列(上、下游各10个碱基)潜在的转录因子结合位点,最低可信值(q)设为0.85。Hardy-Weinberg检验表明各SNP位点已达遗传平衡,确认所选样本具有群体代表性。 采用SPSS13.0统计学软件进行统计,血清尿酸水平和脑梗死体积为非正态分布计量资料,用中位数(Median,M)和四分位数间距(Inter quartile range,IQR)表示,不同基因型组间尿酸水平和脑梗死体积比较采用秩和检验。非心源性缺血性卒中患者预后良好组和预后不良组基因型分布用计数资料表示,组间比较采用Pearson x2检验或者Fishers exact检验,按α=0.05的检验水准分析组间各指标之间是否有统计学意义。 结论: 1.GLUT-9基因5-非翻译区转录起始位点上游-550到-503区存在潜在的核心启动子。 2.GLUT-9基因启动子区SNP位点基因型变异导致部分转录因子结合位点消失和新结合位点产生,GLUT-9基因启动子区SNP位点基因型变异可能对GLUT-9基因表达调控有显著影响。 3.GLUT-9基因启动子区SNP位点基因型变异可能与非心源性缺血性卒中患者血清尿酸水平、脑梗死体积和预后无关。