亚低温对肠粘膜屏障功能的影响

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目的:观察肝门阻断后肠粘膜屏障功能的变化,初步探讨肠粘膜屏障的损伤机制,研究亚低温治疗对肝门阻断后大鼠肠粘膜屏障的保护作用,为亚低温治疗的临床应用提供实验基础。方法:本实验选用雄性SD大鼠30只,按随机原则分为三组,每组10只:①对照组(C):常温下行开关腹术;②常温阻断组(Pringle-N):常温下间断阻断肝门,建立大鼠肠瘀血模型;③亚低温阻断组(Pringle-M):间断阻断肝门,建立大鼠肠瘀血模型,给予亚低温干预,分别于术后1、4、7天分别取外周血,ELISA法检测血浆内毒素、二胺氧化酶、D乳酸浓度;各组大鼠于术后7天断颈处死,分别切取末端回肠及结肠各3cm(距回盲部3cm),行HE及免疫组织化学染色,检测Occludin和sIgA表达水平。结果:1.体重变化:各组大鼠术后体重均较术前减轻(P<0.05),亚低温阻断组较对照组减轻明显(12.00±3.87vs7.60±5.36,P<0.05);常温阻断组较亚低温阻断组减轻明显(18.20±7.64vs12.00±3.87,P<0.05)。2.肠粘膜病理改变:各组大鼠小肠粘膜厚度、绒毛高度、隐窝深度比较,肝门阻断组较对照组均有不同程度下降,存在显著性差异,但亚低温阻断组较常温组下降减轻,差异有统计学意义。3.肠粘膜病理损伤评分:各组间存在显著性差异,常温阻断组病理损伤评分显著高于对照组(30.70±4.45vs14.7±3.16,P<0.01);亚低温阻断组病理损伤评分高于对照组,但显著低于常温组(25.60±4.33vs30.7±4.45,P<0.05),亚低温阻断组较常温组损伤减轻。4.免疫组化染色:Occludin免疫组化染色以上皮细胞胞膜及胞质棕黄色颗粒为阳性细胞,各组均可见有阳性表现,组间阳性细胞百分率存在显著性差异,亚低温阻断组及常温组均较对照组降低,但常温组较亚低温组降低更明显(P<0.05); sIgA免疫组化染色以上皮细胞及浆细胞棕黄色颗粒为阳性细胞,各组均可见有阳性表现,组间阳性细胞百分率存在显著性差异,亚低温阻断组及常温组均较对照组降低,但常温组较亚低温组降低更明显(P<0.05)。5.术后各组血浆内毒素、DAO、D乳酸均较术前明显增高,第1、4、7天逐渐降低,亚低温组较常温组恢复更快,但仍高于术前水平,差异有统计学意义。结论:1.成功建立大鼠肠粘膜瘀血模型,大鼠术后体重下降,小肠形态学改变表现为绒毛坏死,隐窝消失,肠屏障功能改变表现为机械屏障功能受损(肠粘膜Occludin蛋白表达减少)、肠免疫屏障受损(肠粘膜sIgA含量下降),同时发生肠粘膜通透性改变(内毒素、D乳酸升高)。2.亚低温治疗减轻肠瘀血导致大鼠肠粘膜的破坏,使体重丢失程度减轻;减轻瘀血对大鼠肠粘膜Occludin蛋白及sIgA表达的影响;减轻内毒素升高的程度,促进肠上皮损伤的修复,亚低温治疗利于肠粘膜屏障功能保护。
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