黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)T4原生质体诱变育种研究

来源 :哈尔滨工业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cynthia0737
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以从自然界中分离到的产纤维素酶能力较强的黄绿木霉(Trichodermaaureoviride)T4菌株为出发菌株,28℃培养18h后获得菌丝体,用1﹪纤维素酶、0.5﹪溶菌酶和0.5﹪蜗牛酶的混合酶液在32℃酶解3.0h,制得原生质体.用硫酸二乙酯、氯化锂和紫外线对黄绿木霉T4原生质体进行复合诱变处理,在再生培养基上再生培养,获得再生诱变菌株.筛选后得到纤维素酶活力较野生出发菌株大幅度提高的诱变菌株T4-9、T4-13、T4-14、T4-18和T4-21.它们的内切葡聚糖酶酶活相对于出发菌株T4分别提高了21.68﹪、49.94﹪、58.43﹪、36.97﹪和17.68﹪;β-葡萄糖苷酶酶活分别提高了18.54﹪、32.32﹪、44.48﹪、10.08﹪和13.08﹪.传代实验证明这5株诱变菌株产酶性能稳定.实验结果表明原生质体诱变是一种提高黄绿木霉T4纤维素酶产量的有效方法.形态学比较结果显示诱变菌株生长比野生菌株慢,且与酶活呈负相关.诱变菌株孢子颜色较浅,菌丝更发达.黄绿木霉T4及其诱变菌株纤维素酶作用的最适温度都是50℃,最适pH都是5.0.Mg<2+>、Cu<2+>和Ca<2+>是菌株纤维素酶的抑制因子,而Mn<2+>和Zn<2+>是菌株纤维素酶的激活因子.可溶性蛋白电泳结果表明原生质体诱变育种会导致黄绿木霉T4菌株可溶性蛋白图谱的条带发生变化,有部分条带缺失,有些蛋白迁移率发生变化,甚至蛋白主带的位置也发生变化.原生质体的DES、UV-LiCl复合诱变育种可以在黄绿木霉T4菌株酶蛋白上造成显著的差异.酯酶酶谱和苹果酸脱氢酶酶谱中,T4-14出现了新的酶带,谷氨酸脱氢酶和细胞色素氧化酶酶谱,部分诱变菌株酶带相对于野生菌株发生改变.
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