研究依据卵巢癌为妇科恶性肿瘤,死亡率高居不下,其发病隐匿,易于腹腔广泛播散和远处转移,是其发现晚、死亡率高的关键。EFEMP1分子是新发现的一种细胞基质fibulin家族蛋白,研究表明EFEMP1参与调节细胞的形态、生长、粘附和运动过程,并与多种肿瘤的发展、侵袭与转移密切相关。我们利用有限稀释法筛选出高、低转移细胞株S1、S21,它们具有高度的同源性,能保证异质性最小的要求,且具有不同的侵袭转移特性。我们利用DNA微阵列分析对两者的基因表达差异进行分析,结果发现基因差异1.5倍以上的多达1596个基因,其中EFEMP1在高转移克隆细胞株S1中呈现高表达,而在低转移克隆细胞株S21中呈现低表达,两者差异11.739倍,差异显著(P=0.003<0.001)。细胞爬片、Real time RT-PCR和Western blot均证实在高转移克隆细胞株S1中EFEMP1的表达明显高于低转移克隆细胞株S21中的表达。同时在前期研究中,我们发现EFEMP1在卵巢癌组织中明显上调,同时其过表达与卵巢癌恶性分期、分化程度、淋巴转移及不良预后密切相关。据以上数据,我们推测EFEMP1可能与卵巢癌的侵袭转移存在密切关系。因此,本课题展开EFEMP1对卵巢癌侵袭转移作用影响的探究。研究目的1.明确EFEMP1在影响卵巢癌细胞侵袭转移过程中作用影响；2.明确EFEMP1在卵巢癌发生发展中的作用,为卵巢癌的预后判断和更有效抑制侵袭性的卵巢癌提供理论基础。研究方法(1)有限稀释法从同一卵巢癌细胞系SKOV3中分离得到高转移克隆细胞株S1、低转移克隆细胞株S21,S1和S21具有高度同源性,能够满足异质性最小的要求。(2)利用DNA微阵列分析检测两细胞株基因表达差异,同时用细胞爬片、real time RT-PCR和western blot进行验证。(3)构建慢病毒载体外源性强制EFEMP1在低转移克隆细胞株S21中高表达,同时利用RNA干扰沉默EFEMP1在高转移克隆细胞株S1中的表达,利用细胞体外功能分析技术比较外源性强制高表达EFEMP1前后与RNA干扰沉默EFEMP1前后细胞增殖、凋亡与侵袭移动能力变化。(4)进一步构建可视裸鼠移植瘤模型,体内模拟卵巢癌生长、侵袭和转移的过程,深入研究EFEMP1在卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭与移动作用影响。(5)体内体外全面深入研究EFEMP1分子在卵巢癌侵袭转移的关系。研究结果1.EFEMP1分子在不同转移能力细胞株中表达差异DNA微阵列分析结果显示,基因差异1.5倍以上的多达1596个基因,主要涉及TRAIL、SIP、 TNF、 PI3K、 EGFR1、TGFBR等多条信号转导通路,其中EFEMP1在高转移克隆细胞株S1中呈现高表达,而在低转移克隆细胞株S21中呈现低表达,两者差异11.739倍,差异显著(P=0.003<0.001),细胞爬片、real time RT-PCR和western blot均证实EFEMP1在高、低转移细胞株中表达差异。2.外源性强制EFEMP1与RNA干扰沉默EFEMP1前后细胞功能变化(1)慢病毒感染细胞后,转染效率80%以上,real time RT-PCR、western blot及免疫组化验证了转染效果。(2)细胞生长曲线与细胞软琼脂克隆技术结果显示RNA干扰沉默EFEMP1显著抑制了高转移细胞株细胞增殖,同时外源性强制EFEMP1高表达的低转移细胞株增殖能力显著提高。(3)细胞周期检测结果, EFEMP1降表达导致G1/G0期细胞增多,S期(分裂期)细胞减少,抑制细胞增殖；EFEMP1过表达细胞株G1/G0期细胞减少,S期(分裂期)细胞增多,促进细胞增殖。(4)细胞侵袭与移动实验表明,外源性强制EFEMP1过表达促进细胞侵袭与移动,而RNA干扰沉默EFEMP1抑制细胞侵袭与移动。3.建立裸鼠移植瘤模型,体内观察EFEMP1对卵巢癌细胞侵袭转移作用的影响(1)基因干扰组,所形成瘤体体积较小,肿瘤生长较缓慢,成瘤率亦较低；基因过表达组肿瘤生长快,体积大,成瘤率为100%。(2)基因过表达组所形成的瘤块组织呈多结节状,包膜间断不完整,与周围组织连接较为紧密,不易分离。基因干扰组所形成的瘤块组织相对较小,形状光滑椭圆,包膜也较为完整且易于分离。(3)移植瘤组织切片结果显示,相对于高转移克隆细胞株S1,EFEMP1干扰组小鼠肿瘤组织中肿瘤细胞较少,并且无肺转移；而与低转移克隆细胞株相比,EFEMP1过表达组中肿瘤细胞增多,肺转移增加,低转移组无肺转移；S1、S21-exEFEMP1、的肺转移率分别为100%、80%。研究结论(1)EFEMP1分子与卵巢癌发生发展密切相关；(2)EFEMP1分子促进卵巢癌细胞生长、侵袭与移动；(3)EFEMP1分子促使分裂期细胞增多,EFEMP1降表达造成细胞周期阻滞,从而促进细胞增殖,减少凋亡。