本研究以TGEV SC-Y株的毒种为材料扩增克隆M基因，并对其序列进行生物信息学分析；同时利用获得的M基因进行原核表达载体构建、表达及真核表达载体构建研究。主要研究结果如下： Ⅰ、参照GenBank中登录号AJ271965的TGEV基因序列，利用自行设计的一对引物，以ST细胞增殖培养的SC-Y株TGEV为材料，采用RT-PCR技术扩增出M基因，TA克隆构建获得其重组质粒pMD18-TrM。序列分析显示SC-Y株与GenBank中登录的TS、TFI、Purdue、Purdue-115、PUR46-MAD、96-133、HN2002、FS772／70、TO14株M基因核苷酸序列同源性达94％以上，氨基酸序列同源性达91％以上，表明不同毒株M基因保守性较高。M蛋白基因系统进化及其氨基酸同源性分析显示SC-Y株与美国Purdue株亲缘关系较近，同时研究发现我国TS、TFI株分别与韩国HN2002株、英国FS772／70株亲缘关系较近，而我国SC-Y、TS、TFI三株之间亲缘关系则较远，这从一定程度上说明我国TGEV可能为外国输入性。M蛋白氨基酸二级结构综合参数分析、信号肽及跨膜区预测显示，SC-Y株M前体蛋白存在有四个跨膜区(氨基酸残基位于1-16，53-75，86-104，113-135)，其中1-16位为信号肽序列；成熟M蛋白(去除信号肽)为三个跨膜区，其N端位于病毒膜外区，而C端位于病毒膜内区。SC-Y株成熟M蛋白高级结构预测显示其功能结构域在N端主要集中于氨基酸残基8-21，该区域与M蛋白的生物学功能关系密切；预测综合分析显示可形成有效抗原表位的区域在N端氨基酸残基4-30或其附近。 Ⅱ、以pMD18-TrM为材料，扩增、TA克隆构建获得M蛋白去信号肽序列基因的重组质粒pMD18-TΔM。运用DNA技术，将pMD18-TrM、pMD18-TΔM中M蛋白基因及其去信号肽序列基因分别转移定向克隆到pET32a(+)中，获得重组原核表达载体pET32a(+)-rM、pET-32a(+)-ΔM。构建成功后分别转化高效表达菌株E．coli BL21(DE3)进行表达研究。SDS-PAGE电泳检测结果显示，原核重组表达载体pET32a(+)-rM未成功表达出预期目的融合蛋白Trx-M；原核重组表达载体pET-32a(+)-ΔM表达出预期融合目的蛋白Trx-ΔM，其表达量有待进一步研究；Western Blotting检测结果显示，表达的去信号肽目的融合蛋白Trx-ΔM具有特异的生物学免疫原性。