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基孔肯雅病毒(Chikungunyavirus,CHIKV)是单股正链RNA病毒,为披膜病毒科,甲病毒属;病毒颗粒呈T=4正二十面体结构,直径约60-70nm,在电镜下呈圆形。病毒主要有五个结构蛋白(C、E2、E3、6K、E1),E1与E2形成异二聚体,每三个E1/E2异二聚体形成一个微小的凸起,每个病毒颗粒的表面共有80个相同的凸起。在包膜之下E1/E2异二聚体同C蛋白构成的衣壳相连。除结构蛋白外,还有四个非结构蛋白(NS1、NS2、NS3、NS4)主要在病毒复制过程中起辅助调节作用。人感染CHIKV后可引起以关节痛、发热、皮疹为主要症状的基孔肯雅热。大多数患者症状轻,其他症状数周之内可以自行痊愈,但关节痛往往持续存在,影响正常的生活、产生经济负担。少数患者会并发脑炎等重症危及生命。CHIKV通过伊蚊传播,伊蚊分布范围广泛;在2014年CHIKV传入美洲大陆后,在全球大部分地区均有流行报道。同我国临近的东南亚地区一直是基孔肯雅热的主要流行地区之一。我国于1986年首次成功分离CHIKV,2008年首次报道输入性基孔肯雅热,2010年首次由于输入性病例导致的本土基孔肯雅热的暴发流行。随着CHIKV在全球范围内扩大流行,我国仍有再次暴发基孔肯雅热的可能性。在疾病流行的预防控制工作当中,早期诊断十分重要,本研究基于以上目的拟建立血清CHIKV抗原检测的方法。通过杆状病毒表达系统生产CHIKV病毒样颗粒(VLP),该VLP包含CHIKV的全部结构蛋白,在电镜下可以见到圆形颗粒。VLP与灭活的CHIKV有一致的抗原性,可以与抗CHIKV抗体良好结合。VLP由于不含有核酸不具有感染性,相比灭活病毒更加安全,可以在生物安全一级实验室中进行操作,降低了研究的生物安全风险。使用VLP免疫小鼠和家兔制备抗CHIKV的鼠免疫腹水和兔免疫血清。通过免疫荧光方法检测,显示抗体与病毒结合良好;通过ELISA方法检测抗体效价均在1:10万以上。1、以纯化鼠免疫腹水作为包被抗体,兔免疫血清作为捕获抗体,建立了检测CHIKV抗原的双抗体夹心ELISA方法。,该方法法具有较好的特异性和敏感性,在0.1ml中含50TCID50以上CHIKV的样本均可以用本方法检测出;模拟病人血清可被成功检出;登革热、肾综合征出血热病人及健康人血清进行CHIKV抗原检测,均为阴性;重复性良好板间变异小于10%,板内变异小于5%。2、用VLP为抗原建立了检测抗CHIKV IgG抗体的间接法ELISA,VLP拥有的良好抗原性可以替代灭活病毒作为抗原对IgG进行捕获检测。完善抗CHIKV IgM抗体的捕获法ELISA,检测病人急性期血清检测均呈阳性。两种方法重复性良好板间变异小于10%,板内变异小于5%。本研究建立了 CHIKV抗原和抗体检测方法,并进行初步评价,对于临床诊断以及流行病学调查有积极意义。