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牛传染性鼻气管炎病毒(Infectious Bovine Rhinotracheitis virus, IBRV)能引起牛多系统感染,是导致养牛业巨大经济损失的重要病原之一。本试验根据IBRV的gE基因保守序列,设计并合成了一对特异性引物,应用该对引物分别建立了常规PCR及荧光定量PCR检测方法,并对模拟临床样品进行了检测。本试验又根据牛IL-2、IFN-γ及β-actin基因设计合成了三对引物,建立了实时荧光定量PCR的标准曲线以及直线回归方程,并对牛单核巨噬细胞体外感染IBRV后,不同时间段0h、6h、12h、24h、48h表达IL-2.IFN-γ及β-actin mRNA的水平进行了分析。以上两部分试验结果显示：(1)常规PCR和荧光定量PCR检测IBRV gE基因的特异性较好。应用建立的两种方法扩增从IBRV、牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、MDBK细胞和IBRV阴性牛血清提取的核酸,仅IBRV扩增出了特异的片段和曲线。(2)常规PCR和荧光定量PCR检测IBRV gE基因的灵敏性较高。常规PCR的灵敏性为7×103拷贝/μ l,而荧光定量PCR方法的灵敏度达到了70拷贝/μl,比常规PCR方法高100倍。(3)应用两种方法分别对模拟临床样品进行检测,常规PCR方法检测到的病毒含量为3TCID50/反应、而荧光定量PCR方法检测到的是0.03TCID50/反应。(4) IBRV体外感染牛单核巨噬细胞后可以显著降低IL-2和IFN-γ转录水平(P<0.05)。利用同一对引物建立常规PCR及荧光定量PCR。将两种PCR有机的结合在一起使用,对PCR检测IBRV具有潜在的利用价值。同时,建立能够区分野生毒株与疫苗株感染的PCR检测方法。通过对比IBRV感染单核巨噬细胞后,细胞因子IL-2、IFN-y表达水平的动态变化,分析IBRV在影响单核巨噬细胞免疫学功能中的作用地位,为进一步阐明IBRV的致病机理奠定基础。