脓毒血症至今仍是临床重症患者死亡的主要原因，研究表明脓毒血症早期大量炎症介质释放是导致机体严重损伤的重要机制。大量的外源性刺激物如内毒素、外毒素刺激单核细胞、巨噬细胞、内皮细胞、中性粒细胞等炎性细胞失控性释放炎症介质，包括各种炎性细胞因子、黏附素、趋化因子等，进入循环导致组织和弥漫性毛细血管损伤甚至多脏器功能障碍。 羟乙基淀粉(HES)是由从玉米或高梁提炼出的支链淀粉经羟乙基化制备而成，是临床上常为使用的血浆代用胶体，主要用来维持、改善各种患者的血容量，包括脓毒症、创伤、休克或外科应激等。除了能维持稳定的血流动力学，近来一些研究报道HES还具有抗炎作用，在多种炎症病理状态下可以下调炎症介质。我们实验室曾应用内毒素注射模型观察到HES可以下调内毒素大鼠血浆TNF—α，抑制大鼠肺组织内多种炎症介质的表达，最终可以减少内毒素血症大鼠肺的毛细血管渗漏。由于内毒素(LPS)注射模型是单因素介入，与临床脓毒症相关性不强，现该模型仅被认为是内毒素血症模型而非脓毒症模型。于是本课题我们将采用另一种与临床脓毒症有着良好相关性的模型——大鼠盲肠结扎穿孔模型(CLP)对HES抗炎作用做进一步研究。 转录因子例如NF—κB和AP-1，在炎症状态下的炎症介质表达中起重要调控作用，前人的报道也提示内毒素血症中HES发挥抗炎作用与其对NF—κB的影响有关，在下面的研究中我们仍旧继续观察HES对这些转录因子的影响，以图对其抗炎机制做进一步解释。 第一部分脓毒血症动物模型的建立 脓毒血症是临床危重病患者的主要死亡原因之一，动物模型作为脓毒症发病机制和防治研究的基础，在脓毒症研究领域具有举足轻重的作用。在众多脓毒症模型中，CLP是通过外科处理使动物腹腔存在失活组织，同时伴有少量粪便溢入腹腔，两个因素同时作用引起腹腔感染而致全身脓毒血症，该模型与临床相关性好。但以往实验所用CLP模型只强调穿孔大小、穿孔次数对脓毒症轻重程度的影响，却忽视了结扎长度的重要性。本部分实验我们预控制不同结扎长度来复制不同程度的大鼠脓毒血症模型。方法是把大鼠随机分为六组，除假手术组外，其余各组均实施18孔径单次穿孔CLP手术，盲肠结扎分为不同长度(分别占盲肠总长度的10％、25％、35％、40％以及100％)。脓毒症不同程度以CLP术后5小时大鼠血浆TNF—α、IL—6浓度以及72h大鼠生存率比较结果作为衡量标准。结果显示在CLP穿孔大小、穿孔次数一致的情况下，结扎长度越长大鼠血浆TNF—α、IL—6浓度越高，72h生存率越低。这表明除穿孔大小、穿孔次数外，盲肠结扎长度也是决定脓毒症轻重程度的重要因素，在模型应用时应该同时注明三个变量数值以便不同研究之间的比较、模仿。 第二部分羟乙基淀粉对脓毒症大鼠全身炎症反应的影响 HES 是临床上常为使用的血浆代用胶体，除了能维持稳定的血流动力学外，近来一些研究报道HES还具有抗炎作用。本部分实验预应用大鼠CLP模型模拟脓毒症观察HES在脓毒症中的抗炎作用。方法是选择前述CLP25％18单孔穿刺模型，输注不同剂量HES(7.5，15，或30ml/kg)进行液体复苏。于CLP后5h收集大鼠血液及肝、脾、肠组织标本，分别进行细胞因子(TNF—α、IL—6以及IL-10)浓度测定及相应mRNA表达检测。血浆测定结果显示HES可以降低脓毒症大鼠促炎因子TNF—α、IL—6的浓度，作用呈现剂量依赖关系，30ml/kg HES抑制作用最明显；组织测定结果显示输注HES也可以降低脓毒症大鼠肝、脾、肠组织内的TNF—α、IL—6浓度以及抑制相应的mRNA表达，但其作用呈现剂量相关性，最大作用剂量为15ml/kg。这些结果表明HES在CLP脓毒血症中亦能发挥抗炎作用，可以广泛下调血浆、组织内的促炎因子。 第三部分羟乙基淀粉对脓毒症大鼠肺毛细血管渗漏的影响及其机制研究 一些研究初步报道HES可以通过其抗炎生物化学作用减少多种病理状态下的毛细血管渗漏，但其中机制不甚清楚。我们本部分实验的目的是观察HES在脓毒症所致大鼠急性肺损伤(ALI)中是否能减少肿的毛细血管渗漏，以及试图解释HES的这种“堵漏”机制。方法是选择大鼠CLP模型复制脓毒血症，输注不同剂量HES(7.5，15，或30ml/kg)进行液体治疗。于CLP后5h或12h收集大鼠肺组织标本，分别进行肺毛细血管渗漏率检测、肺内炎症细胞因子(TNF—α、IL-1β以及IL—6)浓度测定、肺内炎症介质(CINC、P—selectin、Mac-1和ICAM-1)mRNA表达水平以及肺内转录因子(NF—κB和AP-1)活性检测。结果显示HES可以减轻脓毒症大鼠的肺毛细血管渗漏，且作用大小与剂量相关。同时，HES还可以降低肺内炎症细胞因子(TNF—α、IL-1pβ以及IL—6)水平、炎症介质(CINC和P—selectin)mRNA表达以及抑制肺内转录因子(NF—κB和AP-1)激活。这些结果表明在脓毒症中HES可以减轻肺毛细血管渗漏，并且这一有益作用可能是通过HES下调肺内炎症介质、抑制肺内转录因子激活来实现的。 总结： 我们运用大鼠CLP模型研究HES在脓毒症中的抗炎作用，结果表明HES可以降低脓毒症大鼠血浆中的促炎细胞因子，下调重要炎症反应脏器中的炎症介质表达。尤其在肺中，HES通过抑制促炎细胞因子、黏附素以及趋化因子减少了ALI大鼠肺的毛细血管渗漏，这种作用与其能够抑制转录因子NF—κB、AP-1的活化紧密相关。 目前临床脓毒症治疗仍旧采用联合治疗的方法，即以对症支持治疗为主，抗炎、抗菌治疗为辅的治疗手段。其中液体支持治疗是必不可少的一项，而主要具备扩容疗效的HES相对于其余胶体、晶体又可以发挥抗炎辅助作用，这将为临床治疗脓毒症提供良好的液体复苏选择。