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目的:研究昆明地区2002~2004年210例轮状病毒性肠炎患儿的轮状病毒分子基因特征。 方法:收集昆明医学院第一附属医院2002年、2003年、2004年9月~12月儿科住院部和门诊的急性肠炎患儿的粪便标本210份。采用聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳法检测轮状病毒基因组,用逆转录—聚合酶链反应(RT-PCR)以及巢式—聚合酶链反应(net-PCR)对五种主要的VP7的血清型(G1、G2、G3、G4和G9)进行分型。并采用RT-PCR对VP7阳性标本进行NSP4(非结构蛋白4)的基因扩增,选取30份标本用net-PCR扩增出NSP4 cDNA 500bp并送去测序。测序结果用DNA assist软件包进行翻译,并用直接计数法和x~2检验来处理数据。 结果:1、用PAGE电泳法检测的210份标本中,轮状病毒基因阳性有143份,检出率为68%;其中长型143份(100%),未发现短型和混合型。2、143份PAGE阳性标本有134份可以用RT-PCR扩增VP7基因全长,占93.7%,其中G1、G2、G3、G4、G9血清型检出率分别是28.4%(38/134),0.00(0/134),54.5%(73/134),3%(4/134),0.00(0/134),混合型占6%(8/134),未分型8.2(11/134),未分型的有待进一步研究进行分型。3、不同年份RV血清型的构成比不同,2002年以G1型为主,2003年以及2004年以G3型为主。4、NSP4 cDNA 500bp测序结果显