论文部分内容阅读
目的：本实验通过制备人胃癌细胞SGC7901原位移植裸鼠模型，应用免疫组织化学(S-P法)及RT-PCR检测人胃癌细胞原位移植裸鼠模型原发灶及转移灶中ZNF-139、MRP-1、MMP-7及其mRNA表达的差异，探讨不同组织细胞体外化疗药敏性差异产生的机制。 方法： 1.建立人胃癌细胞系SGC7901(中分化腺癌)原位移植裸鼠模型 收集体外培养的对数生长期SGC7901细胞，配制成细胞悬液后进行裸鼠皮下注射，待皮下移植瘤生长至直径约1.0cm左右时取出，取大小约1mm3胃癌组织块接种到下一只裸鼠的皮下，进行鼠间传代，以相同方法传代6次后取出移植瘤，剪成1mm3大小组织块进行胃前壁浆膜下原位移植，获得人胃癌原位移植裸鼠模型。均于荷瘤鼠出现全身衰竭征象时脱颈处死，取出原位移植瘤、肝脏、脾脏、腹膜结节、腹腔及胸腔肿大淋巴结，每个标本一分为二，一份迅速置-80℃冰箱保存备用，一份用福尔马林固定备用。 2.应用免疫组织化学法(S-P法)检测锌指蛋白139(ZNF-139)、基质金属蛋白酶7(MMP-7)、多药耐药相关蛋白1(MRP-1)在原位移植瘤、肝转移灶、脾转移灶、腹膜种植转移灶、转移淋巴结中的表达情况。 3.应用RT-PCR法检测ZNF-139mRNA、MMP-7mRNA、MRP-1mRNA分别在原位移植瘤、肝转移灶、脾转移灶、腹膜种植转移灶、转移淋巴结中的表达情况。 结果： 1.应用OB生物胶粘贴法成功地建立了人胃癌完整组织块裸鼠原位移植转移模型，原位成瘤率为100％。30只裸鼠中两只于处死前死亡，荷瘤生存期分别为78天和81天，解剖尸体可见巨大原位移植瘤及多发腹膜种植转移。待荷瘤鼠出现消瘦、弓背、活动差时脱颈处死，解剖其余28只荷瘤鼠取原位移植瘤、肝脏、脾脏、腹膜种植结节、腹腔及胸腔淋巴结，均经HE染色组织病理学检查，结果发现，其中21只(75％)移植鼠中出现肝脏转移，19只(67.86％)出现脾脏转移，24只(85.71％)出现腹膜种植转移，11只(39.29％)出现淋巴结转移。 2.免疫组织化学法(S-P法)结果显示ZNF-139在原位移植瘤、肝转移灶、脾转移灶、腹膜种植转移灶、淋巴结转移灶中的表达阳性率分别为64.29％，90.48％，84.21％，91.67％，100％；MMP-7在原位移植瘤、肝转移灶、脾转移灶、腹膜种植转移灶、淋巴结转移灶中的表达阳性率分别为64.29％，90.48％，78.95％，91.67％，100％；MRP-1在原位移植瘤、肝转移灶、脾转移灶、腹膜种植转移灶、淋巴结转移灶中的表达阳性率分别为67.86％，95.24％，73.68％，91.67％，100％。ZNF-139、MRP-1、MMP-7在肝转移灶、腹膜种植结节及转移淋巴结中表达高于裸鼠原位移植瘤组织，统计分析显示有显著差异(P<0.05)。Spearman相关分析结果显示ZNF-139的表达在各组内分别与MMP-7及MRP1呈正相关。 3.应用RT-PCR法检测结果显示ZNF-139 mRNA在原位移植瘤、肝转移灶、脾转移灶、腹膜种植转移灶、淋巴结转移灶中表达的IOD值为0.7760±0.1916，1.1909±0.1275，0.7312±0.1275，1.3257±0.1814，1.6514±0.2863；MMP-7 mRNA在原位移植瘤、肝转移灶、脾转移灶、腹膜种植转移灶、淋巴结转移灶中表达的IOD值为0.6746±0.1333，1.3776±0.1292，0.7589±0.2330，1.2558±0.1218，1.6694±0.2364；MRP-1mRNA在原位移植瘤、肝转移灶、脾转移灶、腹膜种植转移灶、淋巴结转移灶中表达的IOD值为0.6629±0.5014，1.2477±0.1529，0.6854±0.1564，1.2838±0.1668，1.7807±0.1875。ZNF139mRNA，MRP-1mRNA，MMP-7mRNA在肝转移灶、腹腹膜种植结节及转移淋巴结中表达高于裸鼠原位移植瘤组织，经t检验统计分析显示有显著差异(P<0.05)。Pearson直线相关结果显示ZNF-139mRNA的表达在各组内分别与MMP-7mRNA及MRP-1mRNA呈正相关。 4.实验数据应用SPSS17.0统计软件进行处理，计量资料统计分析采用t检验及Pearson直线相关分析，计数资料采用x2检验及Spearman相关分析，P<0.05为有统计学意义。 结论： 1.人胃癌裸鼠原位移植裸鼠模型可近似模拟胃癌在人体内的发生、增殖、侵袭、转移等生物学行为，与其他种类模型相比，操作简单、成瘤率高、肿瘤生长快、饲养成本不高，可作为目前非常理想的研究胃癌的实验工具。 2.ZNF139作为转录水平的基因调控因子，在胃癌及转移灶的表达可能促进MRP-1、MMP-7的表达，其表达差异导致胃癌原发灶与转移灶间耐药性、增殖、侵袭、转移等生物学行为的差异。 3.因ZNF139在基因转录水平的调控，MMP-7与MRP-1在相同组织中的表达呈正相关，可能导致胃癌转移灶比原发灶中MRP-1表达升高，胃癌细胞耐药性高，对化疗药物不敏感，更易发生MDR。