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目的:1、建立的总皂苷含量测定方法,并以总皂苷含量为指标,考察大孔吸附树脂分离纯化泄浊除痹方总皂苷的最佳工艺,成功分离得到总皂苷部位;2、利用黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶反应体系,检测药物对黄嘌呤氧化酶(XOD)活性是否有抑制作用;3、原代培养小鼠肾小管上皮细胞(RTECs),通过MTT试验考察药物作用的浓度和时间;提取药物作用后细胞总RNA,考察药物对GLUT9的基因表达是否有影响。方法:1、通过单因素考察,建立总皂苷含量测定方法,以总皂苷含量为检测指标,筛选树脂类型,考察上样量、上样流速、洗脱液浓度等因素,得到分离总皂苷的最佳工艺;2、体外模拟黄嘌呤-黄嘌呤氧化酶反应体系,反应液用尿酸试剂盒检测吸光度A值,通过对A值的分析,推测黄嘌呤氧化酶活性,探究总皂苷对XOD活性的抑制作用;3、原代培养小鼠肾小管上皮细胞,通过MTT试验,考察药物对细胞最佳作用浓度和时间,SPSS软件分析处理数据,得出最佳孵育浓度和时间,并提取经药物孵育后细胞的总RNA,设计GLUT9上下游引物,进行PCR,经琼脂糖凝胶电泳后于凝胶成像仪拍照,quantity-one软件进行相对表达量的分析。结果:1、采用紫外-分光光度法,香草醛-冰醋酸-高氯酸显色体系,检测波长为456nm,优选出条件为60℃水浴15min,经测定泄浊除痹方总皂苷的含量为10.28%;方法学考察结果为吸光度与质量浓度的线性关系范围为0.0426~0.2982mg`mL-1,r=0.9996,平均加样回收率97.51%;2、通过工艺考察,筛选出D-101型大孔吸附树脂作为分离总皂苷的树脂类型,因其具有较大吸附和解析率,能达到最佳的分离效果;对其工艺条件的考察,最佳分离工艺为:上样液皂苷浓度5.205mg·mL-1.上样体积为1.5BV(BV为树脂床体积),以1.0BV·h-1的吸附速率进行吸附,30%乙醇5BV进行洗脱效果最佳,经D-101处理后的泄浊除痹方总皂苷可达80%以上;3、体外活性试验表明总皂苷对黄嘌呤氧化酶抑制率的IC50值为29.37μg/mL;4、 MTT试验结果表明泄浊除痹方总皂苷在50μg·mL-1~500μg·mL-1浓度范围内对RTECs细胞增殖无显著抑制;在50μg·mL-1~500μg·mL-1.范围内,GLUT9的基因表达明显下调,且呈浓度依赖性。结论:1、D-101型大孔吸附树脂能够用于分离纯化泄浊除痹方,并得到总皂苷部位;2、泄浊除痹方总皂苷能够有效抑制XOD活性,其IC50值为29.37μg;3、在浓度范围为50μg·mL-1~500μg·mL-1内,泄浊除痹方总皂苷对RTECs细胞的增殖无抑制作用,并且能够降低细胞内GLUT9基因的表达。