沙棘叶提取物对结直肠癌细胞HCT116的抑制作用

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结直肠癌(Colorectal cancer,CRC)是常见的发病率和致死率较高的一种恶性肿瘤,对其治疗方式一般为手术配合化疗,治疗过程中会给患者带来极大痛苦,而结直肠癌高复发率和高转移率的特点,也导致其难以治愈。寻找一种能抑制结直肠癌生长,减少患者痛苦,提高患者生存质量的药物或物质成为当前迫在眉睫需要解决的问题。沙棘(Hippophae rhamnoides Linn.)药食同源植物之一,在山西省有丰富的沙棘资源,我国对其抗癌功效的研究由来已久但没有深入。本研究采用高效液相色谱仪测定了中国沙棘(Hippophae rhamnoides L.subsp.sinensis)沙棘叶中多酚、黄酮、五环三萜类等抗癌物质的含量,并有针对性的对已确定的抗癌成分进行了提取和浓缩,利用沙棘叶提取物作用于结直肠癌HCT116细胞,采用CCK-8、流式细胞术和荧光染色法,测定沙棘叶提取物对HCT116癌细胞的抑制作用,采用Western Blot对Caspases相关蛋白的表达进行测定,确定沙棘叶提取物促进细胞凋亡的分子机制。HPLC法测得沙棘叶提取物中含有没食子酸的含量为2.3633 mg/g,齐墩果酸的含量为0.76 mg/g,熊果酸含量为2.71 mg/g,槲皮素含量为1.31 mg/g,山奈酚含量为1.51 mg/g,异鼠李素含量为2.46 mg/g。将其配置成100、200、400、600、800μg/mL的测试药物,作用于HCT116细胞后,测得沙棘叶提取物对其抑制率的IC50值为135.54μg/mL,并且随着作用浓度的增加抑制率也增加。用流式细胞仪对其凋亡进行检测,测得沙棘叶提取物能使得绝大多数HCT116细胞在细胞周期早期凋亡,且对其最大抑制率能达到43.6%,说明HCT116细胞对沙棘叶提取物较为敏感;荧光显微镜下观察药物处理后经DAPI染色的HCT116细胞,发现随着作用浓度的增大,细胞核发生凝聚固缩断裂的细胞数量也增多。用Western Blot对与凋亡相关的蛋白进行检测,结果表明随着提取物浓度的增加Caspase3和Caspase12的表达量显著增加,Bcl-2的表达量显著降低,说明沙棘叶提取物主要是通过内质网凋亡途径和改变线粒体外膜通透性共同作用,从而抑制结肠癌细胞HCT116生长。综上所述,沙棘叶中含有多种抗癌物质,且其含量丰富,将其提取浓缩后能通过内质网凋亡途径促使结肠癌HCT116细胞凋亡。本研究不仅为寻求新的、安全的、有效的抗癌产品的开发提供思路,同时为山西省沙棘的深层次、多角度开发埋下伏笔。
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