基于人源诱导多能干细胞构建三维神经网络的研究

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干细胞是近年来利用外源性转录因子将已分化成熟的细胞进行重编程得到诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPSCs),而这类干细胞具有与胚胎干细胞相似的功能和特征,利用诱导多能干细胞构建三维神经网络,对研究中枢神经系统和神经疾病具有十分重要的意义。利用带有疾病基因的成熟体细胞,将其重编程为多能干细胞,由这种细胞分化而来的神经细胞具有疾病的原特质,这种疾病特异性iPSCs为研究疾病的机制和发病过程提供了样本,也为药物开发、治疗方案的制定提供了动力。基于三维支架和人源诱导多能干细胞,本论文构建了3D神经网络结构,完成了人源诱导干细胞定向分化为运动神经元及神经网络的构建,主要开展的工作及得到的结论如下:1.通过加入诱导因子,将hiPSCs定向分化为神经细胞(hiPSCs-NC),通过倒置显微镜观察发现分化后的细胞呈现神经细胞生理形态,免疫荧光染色和逆转录-聚合酶链式反应结果显示hiPSCs-NC能表达其特异性蛋白和特征基因。2.通过加入诱导因子,将hiPSCs定向分化为运动神经元,通过免疫荧光染色和流式细胞术分别对分化后的细胞进行鉴定,证明通过现阶段探索的分化方法,成功并高效率地将hiPSCs分化为运动神经元。3.利用光刻技术和静电纺丝得到的3D支架规整排列微柱结构,纺丝间距小于8μm,尺寸小于细胞的大小,在此3D支架上进行培养分化hiPSCs-NC,利用激光共聚焦显微镜等仪器进行表征。
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