大鼠下颌骨牵张成骨蛋白质组学初步分析

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牵张成骨(Distraction Osteogenesis, DO),是指在已截开的骨段间或在骨缝处通过安置牵张装置,施加牵引力,牵开骨断端,在因此产生的骨间隙中形成新生骨组织,以达到骨延长及骨增宽的目的。目前,随着牵张成骨技术的成熟和完善,此技术得到了越来越多的地应用,尤其是在纠正颌面部畸形及修复骨缺损的的治疗方面得到了广泛的肯定。随着实验研究的深入及发展,促进牵张成骨新骨形成的办法愈来愈多,但牵张成骨新骨形成的机理上存在很多疑问,观点上也存在一定分歧。后基因组时代,功能基因组的研究已经逐渐取代遗传信息的揭示成为了研究的重点。蛋白质是生物功能最为主要的体现者,而其自身有着特有的活动规律,例如蛋白质结构变化、转运定位、修饰加工、蛋白质与其他生物大分子的相互作用等,在基因水平的研究是无法获得的。正因如此,对细胞及机体蛋白质组成及其活动规律从整体水平进行探讨,成为了人们迫切的愿望。蛋白质组是整体概念,随着时间空间变化而发生动态变化。只有开展蛋白质组学研究,即对所有蛋白质总和进行研究,才能更好地揭示生命活动的本质和发现生命活动的规律,才能更好地掌握生命现象和本质的。本研究的主要目标是建立大鼠下颌骨牵张成骨的动物模型,对其牵张区域内的新生组织进行总蛋白的提取,蛋白质定量,运用iTRAQ技术进行蛋白质组学分析,分析大鼠下颌骨牵张成骨过程中新生组织蛋白表达的改变,从整体水平探讨其新生骨组织的蛋白质变化,为阐明揭示下颌骨牵张成骨的机制提供理论依据。全文分为2部分:1大鼠下颌骨牵张成骨新生骨组织蛋白质定量实验研究目的:建立大鼠下颌骨牵张成骨模型,对牵张区域新生组织进行总蛋白提取及蛋白质定量。方法:以6只雄性SD大鼠为实验动物,行单侧下颌骨牵张成骨,随机分为2组,每组3只,分别于固定期第1d(A组)及14d(B组)取材,对其牵张区域总蛋白提取及蛋白质定量检测,应用SPSS12.0软件包进行配对t检验。结果:成功提取大鼠下颌骨牵张成骨牵张区域新生组织标本,测定A组3个蛋白质样本与B组3个蛋白质样本的蛋白质浓度(R=0.984),测量结果运用SPSS12.0软件进行配对t检验,P<0.01。结论:大鼠下颌骨牵张成骨牵张区域新生组织固定期第1d较固定期14d,总蛋白表达含量明显升高,提示在牵张成骨早期,蛋白质表达活跃,为下一步蛋白质组学分析奠定了基础。2大鼠下颌骨牵张成骨新生骨组织蛋白质组学初步分析目的:探讨用蛋白质组学iTRAQ技术分析大鼠下颌骨牵张成骨过程中新生组织蛋白表达的改变。方法:应用iTRAQ技术对实验一下颌骨牵张成骨新生组织的蛋白质样本进行检测,寻找及鉴定差异蛋白。结果:应用iTRAQ技术对大鼠下颌骨牵张成骨的新生骨组织成功进行了蛋白质组学分析,质谱鉴定出置信度95%的蛋白质共567种,共鉴定出差异蛋白207个,其中上调≥1.5倍的47个,下降≤0.8倍的58个。结论:筛选出多种与牵张成骨过程中新骨形成相关的差异表达蛋白质,为进一步验证与新骨形成相关的蛋白质奠定了基础。
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