论文部分内容阅读
本论文从羧酸酯酶(CarE)测定方法、靶标酶和解毒酶体躯和亚细胞分布、发育期变化规律、化学农药毒力测定以及亚致死剂量化学农药对东方蜜蜂Apis cerana和西方蜜蜂Apismellifera解毒酶影响等方面进行了系统的比较研究,以期为蜜蜂保护,尤其是我国东方蜜蜂保护提供依据。同时,研究了氟胺氰菊酯对西方蜜蜂和大蜂螨选择毒性,明确了大蜂螨抗性水平,确定了抗性机制,为中国大蜂螨防治提供理论和应用依据。实验结果如下:
1.以α-乙酸萘酯(α-NA)为底物,采用正交方法确定了西方蜜蜂CarE活力测定最佳条件为酶终浓度0.3个腹部/mL、底物终浓度4×10<-4>mol/L、pH值7.0、温度35℃、时间10 min。
2.比较研究了两种蜜蜂成年工蜂靶标酶和解毒酶体躯和亚细胞分布。头部是蜜蜂乙酰胆碱酯酶(AChE)活性最高部位,在细胞内活性主要集中在线粒体层。CarE主要集中在腹部,在细胞内主要存在于细胞液中。谷胱甘肽硫转移酶(GST)活性主要集中于中肠,在细胞中主要位于细胞液中。但不同蜂种不同组织的不同亚细胞层比例不同。东、西方蜜蜂各躯段CarE与底物亲和力不同。
3.从幼虫到成虫,GSTs和CarE活性存在显著变化,AChE活性变化不显著。东方蜜蜂AChE和GSTs活性随着发育进程呈增加趋势,西方蜜蜂工蜂体内AChE活性呈减少趋势。
东方蜜蜂除蛹期AChE活性显著高于西方蜜蜂外,其它发育期AChE和GSTs活性低于西方蜜蜂,CarE活性则高于西方蜜蜂(α-NA为底物)。不同发育阶段东、西方蜜蜂CarE底物特异性不同。西方蜜蜂雄蜂幼虫和蛹三种酶活性高于工蜂。
4.西方蜜蜂成年工蜂三种酶活性随日龄变化。21日龄时GST活性显著升高。
5.AchE、CarE和GST活性在蜂种间存在显著差异。意大利蜂AChE活性最高。高加索蜂GST活性活性最高。以仅α-NA为底物时,蜂种间CarE差异不显著。以β-NA为底物时,卡尼鄂拉蜂CarE活性最高。不同蜂种以β-NA为底物时CarE活性均高于以α-NA为底物活性。
6.对甲氰菊酯等5种化学药剂,东方蜜蜂比西方蜜蜂更敏感。LC<,5>五种化学药剂在24h内对东、西方蜜蜂解毒酶作用不同。农药对东方蜜蜂CarE、AChE(马拉硫磷除外)影响大于西方蜜蜂,而对GST影响则是西方蜜蜂大于东方蜜蜂(双甲脒除外)。
7.LC5甲氰菊酯、灭多威和马拉硫磷能诱导东方蜜蜂AChE活性增加,降低西方蜜蜂AChE活性。LC<,5>氟胺氰菊酯诱导西方蜜蜂AChE活性增加,抑制东方蜜蜂AChE活性增加。LC<,5>双甲脒能诱导东方蜜蜂AChE,对西方蜜蜂影响不大。五种农药均可以诱导东方蜜蜂腹部CarE增加,其中氟胺氰菊酯是先诱导再抑制。五种化学农药均抑制西方蜜蜂体内CarE活性。除灭多威外的四种化学药剂均抑制西方蜜蜂GST活性,灭多威在2-16h诱导,20-24h抑制。对东方蜜蜂而言,甲氰菊酯、灭多威能抑制GST酶活性:双甲脒诱导GST;马拉硫磷和氟胺氰菊酯先抑制再诱导。
8.生物测定结果表明,西方蜜蜂对氟胺氰菊酯的耐受性要明显高于大蜂螨。不同地方大蜂螨种群对氟胺氰菊酯抗性水平不同。Beijing2和Zhejiang种群为氟胺氰菊酯敏感种群。抗性分析结果表明,多功能氧化酶活性增加,AchE敏感度下降可能是打蜂螨抗性机制。