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研究一:利用同源克隆技术和c DNA末端快速扩增(RACE)技术克隆大口黑鲈磷脂酰肌醇-3-激酶p85(PI3KR1)和蛋白激酶B1(AKT1)基因的全长序列,在此基础上,对上述基因进行多重序列比对及进化树分析。利用实时定量PCR技术检测PI3KR1和AKT1基因在组织中的表达差异。结果如下:1、大口黑鲈PI3KR1全长为4170 bp,其中5′端非编码区245bp,开放阅读框1389 bp,3′端非编码区2536 bp,共编码462个氨基酸。克隆所得大口黑鲈PI3KR1基因与大黄鱼的PI3KR1基因相似度较高。从进化树结果上看,大口黑鲈的PI3KR1基因的氨基酸序列与深裂眶锯雀鲷和大黄鱼亲缘性较近,与哺乳动物的亲缘性较远。2、AKT1基因全长为3672 bp,其中5′端非编码区346 bp,开放阅读框1422bp,3′端非编码区1904 bp,共编码473个氨基酸。克隆所得大口黑鲈AKT1基因与大黄鱼的AKT1基因相似度较高。从进化树结果上看,大口黑鲈的AKT1基因的氨基酸序列与欧洲鲈和大黄鱼亲缘性较近,与哺乳动物的亲缘性较远。研究二:试验饲料中添加白藜芦醇(Resveratrol,RSV)的水平对大口黑鲈(初重33.76±0.12g)的生长性能、肝糖原积累、糖代谢和非特异性免疫的影响。分别以5%淀粉和10%淀粉配制两种等氮等脂饲料,作为正对照(LC)和负对照(HC)。在负对照组的基础上,梯度添加0.05%,0.10%,0.25%和0.50%的白藜芦醇。试验用鱼禁食24小时后,挑选大小相近活力强劲的初始体重为33.76±0.12g的鱼随机分配到18个鱼缸(水量为800L)中作为试验用鱼,每个鱼缸30尾鱼。每天上午8点和下午4点用上述饲料饱食投喂两次,养殖试验进行9周。试验期间,养殖系统的循环水经过物理过滤后再经紫外消毒。水温保持在27±1℃,p H 7.2±0.2,采用自然光照。研究结果如下:1、白藜芦醇的添加对试验鱼的生长、体组成和饲料利用的影响。各处理组间大口黑鲈的存活率无显著差异(P>0.05)。与低糖饲料(LC)组相比,高糖饲料(HC)降低了试验鱼的特定生长率,但影响并不显著(P>0.05)。高糖饲料的摄入显著提高了大口黑鲈的肝体比,但白藜芦醇的添加则明显降低了高糖饲料诱导的肝体比的升高(P<0.05)。饲料糖水平的升高对大口黑鲈的脏体比没有显著影响(P>0.05);与HC处理组相比,白藜芦醇的添加降低了高糖饲料大口黑鲈的脏体比(P>0.05),且0.25%白藜芦醇处理组大口黑鲈脏体比显著低于0.50%白藜芦醇处理组(P<0.05)。各处理组间大口黑鲈肥满度没有显著性差异(P>0.05)。高糖饲料的摄入显著降低了试验鱼的摄食率(P<0.05),而白藜芦醇的添加对其摄食率没有显著影响(P>0.05)。高糖饲料组的大口黑鲈的饲料效率和蛋白质蛋白质效率显著高于低糖组(P<0.05)。白藜芦醇的添加对上述两个指标没有显著影响(P>0.05)。各处理组间大口黑鲈的全鱼体组成、肌肉成分和肝脏水分均无显著差异(P>0.05)。0.10%白藜芦醇处理组显著提高了高糖饲料组的大口黑鲈的肝脏蛋白质含量(P<0.05);0.25%和0.50%白藜芦醇处理组的大口黑鲈的肝脏脂肪含量显著高于0.10%白藜芦醇处理组(P<0.05)。HC组大口黑鲈的肝糖原和肌糖原含量均显著高于LC组(P<0.05),白藜芦醇的添加显著降低了高糖饲料诱导的大口黑鲈肝糖原和肌糖原累积(P<0.05)。2、白藜芦醇的添加对试验鱼的餐后血糖、胰岛素信号通路、糖代谢相关基因表达影响在餐后24小时,各处理组间大口黑鲈血糖含量无显著差异(P>0.05)。在餐后0、1、3、6、12时间点,白藜芦醇的添加均能显著降低高糖饲料诱导的大口黑鲈的血糖含量升高(P<0.05)。饲料糖水平的升高显著降低了SIRT1的表达,而0.10%和0.25%的白藜芦醇的添加显著地提高了该基因的表达(P<0.05)。各处理组间大口黑鲈胰岛素受体(IR)的表达无显著差异(P>0.05)。HC组大口黑鲈磷脂酰肌醇-3-激酶p85(PI3KR1)的表达量显著低于LC组(P<0.05),白藜芦醇的添加对其表达没有造成显著影响(P>0.05)。饲料糖水平的升高对大口黑鲈蛋白激酶B1(AKT1)的表达影响不显著(P>0.05),但是0.10%和0.25%白藜芦醇处理组大口黑鲈蛋白激酶B1(AKT1)的表达相比HC组显著升高(P<0.05)。高糖饲料显著提高了大口黑鲈叉头转录因子O1(FOXO1)的表达(P<0.05),白藜芦醇的添加则显著降低了该基因的表达(P<0.05)。与HC组相比,白藜芦醇的添加显著提高了大口黑鲈葡萄糖激酶(GK)和6-磷酸果糖激酶(PFKL)的表达(P<0.05)。大口黑鲈的丙酮酸激酶(PK)的表达在各处理组没有显著差异(P<0.05)。高糖饲料并未显著影响糖异生相关基因葡萄糖-6-磷酸催化亚基(G6PC)、果糖-1,6-二磷酸酶-1(FBP1)和磷酸烯醇式丙酮酸羟基酶(PEPCK)的表达(P>0.05)。0.25%和0.50%白藜芦醇处理组显著降低了高糖饲料诱导的大口黑鲈的葡萄糖-6-磷酸催化亚基(G6PC)的表达的升高(P<0.05)。与HC组相比,白藜芦醇的添加显著提高了果糖-1,6-二磷酸酶-1(FBP1)和磷酸烯醇式丙酮酸羟基酶(PEPCK)的表达(P<0.05)。3、白藜芦醇的添加对试验鱼非特异性免疫的影响饲料糖水平的升高显著降低了大口黑鲈血清和肝脏中的溶菌酶含量(P<0.05),白藜芦醇的添加能显著提高溶菌酶含量的降低(P<0.05)。各处理组大口黑鲈血清补体C3、C4和肝脏补体C3的含量没有显著差异(P>0.05);高糖饲料的摄入显著提高了肝脏中C4的含量(P<0.05),0.25%和0.50%白藜芦醇处理组显著降低了高糖饲料导致的肝脏中C4含量升高(P<0.05)。各处理组间大口黑鲈Rel A的表达没有显著差异(P>0.05)。大口黑鲈白细胞介素1β(IL-1β)的表达没有受到饲料糖水平的影响;与HC组相比,白藜芦醇的添加显著降低了白细胞介素-1β(IL-1β)的表达(P<0.05)。高糖饲料的摄入显著提高了大口黑鲈肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达(P<0.05)。饲料糖水平的升高对大口黑鲈白介素10(IL-10)和转化生长因子β(TGF-β)的表达没有显著影响(P>0.05),白藜芦醇的添加显著促进了IL-10和TGF-β的表达(P<0.05)。