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家蚕是鳞翅目昆虫的代表,在昆虫的生理、发育、遗传和内分泌等研究领域发挥着重要作用,而且蚕桑业在许多国家的农业经济中也占有重要地位。家蚕核型多角体病毒(Bombyx mori nuclear polyhedrosis virus,BmNPV)是血液型脓病的病原,该病毒的扩散能给养蚕业造成巨大的损失。蜕皮是家蚕生长中必须要经历的过程,家蚕必须脱去旧表皮,才能进行正常的生长。所以对家蚕与BmNPV之间相互作用的研究及对家蚕蜕皮机制的研究对深入理解BmNPV的感染途径、家蚕对BmNPV的免疫机制和家蚕的发育等方面具有重要意义。家蚕基因组序列已经完成,但mRNA和蛋白质之间并不呈严格的线性关系,蛋白质才是生命活动的执行者,所以在蛋白质水平对家蚕的生命活动进行研究是必需的。蛋白质组学是对细胞、组织或器官中所有的蛋白质进行研究的科学,自该技术应用到生命科学以来就显示了强大的发展前景。本试验用蛋白质组学方法对家蚕幼虫受到BmNPV侵染后及蜕皮前后的血淋巴蛋白质变化进行了研究,结果如下:
一、BmNPV侵染状态下家蚕幼虫血淋巴的蛋白质组学分析
为更深的理解家蚕与BmNPV之间的相互关系,用蛋白质组学方法对注射BmNPV后不同时间家蚕幼虫的血淋巴中蛋白质变化进行研究。结果显示,注射BmNPV后,随着时间的延长,家蚕幼虫血淋巴中的蛋白质种类呈明显降低趋势;在注射BmNPV后的第12h和24h时,试验组和对照组相比,共有16个蛋白点发生了上调或下调,对这16个蛋白进行质谱鉴定,其中13个具有可信结果(共11种蛋白质)。结果暗示这11种蛋白质、在数据库中没有可信匹配结果的3种蛋白质以及受BmNPV关闭的基因可能与BmNPV和家蚕幼虫的相互作用或与家蚕幼虫对BmNPV的免疫过程有关。
二、蜕皮前后家蚕幼虫血淋巴的蛋白质组学分析
通过对家蚕幼虫血淋巴在蜕皮前后的蛋白质变化进行研究,可以发现与蜕皮过程有关的蛋白质,为深入研究家蚕幼虫的蜕皮过程提供新的思路,也为研究其它昆虫的蜕皮过程提供启示。应用蛋白质组学方法对家蚕幼虫血淋巴在蜕皮前后的蛋白质变化进行研究。结果显示:经过蜕皮过程后,家蚕幼虫血淋巴中蛋白质的数量、种类和部分蛋白质的表达量发生了明显的变化:4眠蚕血淋巴中有10个明显的特异蛋白点,5龄起蚕血淋巴中2个明显的特异蛋白点,还有2个蛋白点的表达量发生了明显的上调或下调。经过质谱鉴定,以上14个蛋白点中有9个具有可信结果。结果暗示化学感应蛋白9、储存蛋白2、抗胰蛋白酶原、酚氧化酶原亚基1和亲环蛋白A、KIF27类蛋白、天蚕素原、副肌球蛋白、神经原钙结合蛋白以及另外5种未被鉴定的蛋白质可能与家蚕幼虫的蜕皮过程有关。