猪冠状病毒感染对于生猪养殖业的危害,一直以来都受到高度关注,而其发病原因复杂多样,使得在基层养殖场中,针对该类疫病的临床鉴别诊断成为一个难点。血清学调查及流行病学调查结果显示,猪冠状病毒感染在世界范围内均有发生,有时甚至呈爆发式传播。猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪血凝性脑脊髓炎病毒(PHEV)为临床上3种常见的仔猪易感冠状病毒,对幼龄仔猪的致死率较高。由于PEDV、TGEV、PHEV感染均出现明显的呕吐、腹泻症状,因此在传统类症鉴别诊断时,人们常常将其混淆、误诊。可视化芯片技术,是应用传统生物芯片的基本模式,适配可视化显色方法而产生的1种检测方法,含可视化蛋白芯片和基因芯片,兼具快速、可视、操作简易、设备要求低、成本低等优点。近些年该技术被广泛应用于动植物病原、基因突变或分型检测等,在生物学、医学、药理学、遗传学等各类学科中发挥着重要作用。本研究首先对上述3种病毒的核蛋白(N)进行原核表达与纯化,将纯化后的N蛋白分别加样至芯片载体上,经干燥、固定、封闭、洗涤等反应体系优化,制备出1种可同时检测上述3种病原特异性抗体的可视化蛋白芯片。检测时,在标准化蛋白质芯片上加入待检血清、洗涤、干燥、加入二抗孵育、洗涤、干燥、加入显色液显色,洗涤干燥后即可肉眼观察结果。将其初步应用于临床检测表明,该标准化蛋白质芯片特异性强,在多种复杂血清环境下均无交叉反应;敏感性良好,最低检测限为稀释12 800倍;此外,该方法与ELISA的符合率在90%之上。本研究制备的可视化抗体芯片,能够迅速、高效、大量地对猪流行性腹泻、猪传染性胃肠炎、猪血凝性脑脊髓炎进行类症鉴别诊断,并有望应用于临床门诊及基层养殖场中针对PEDV、TGEV、PHEV 3种病原特异性抗体水平监测。该检测方法的建立,在基层临床、养殖场等设备条件不足的情况下,对于该类疫病的及早诊断、防治能起到积极促进作用,为其他动物病毒性疾病检测方法的革新提供重要参考,有利于适应当今动物疫病检测的市场需求。将对生猪养殖业集约化、规模化、自动化产生良性促进作用,有望为人类的食品安全环境带来重要提升。