SELDI蛋白芯片技术筛选脑胶质瘤血清肿瘤标记物的研究

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目的:筛选胶质瘤患者血清中差异蛋白,建立诊断模型并进行验证;蛋白库中查询、鉴定差异蛋白,探讨其在胶质瘤发病机制中发挥的作用。方法:对30例胶质瘤患者(治疗前、后组)及12例健康对照者的血清采用表面增强激光解析离子化-飞行时间质谱技术(SELDI-TOF-MS)结合阴离子交换芯片(WCX—2)及蛋白质芯片时间飞行质谱仪进行蛋白质谱分析,运用Biomark Wizard Systerm软件分析血清蛋白组谱,寻找有统计学意义的差异蛋白;运用Biomark PatternSysterm软件分析蛋白质谱,建立胶质瘤诊断模型,并进行验证;在UniProt蛋白数据库中对差异蛋白进行搜索、鉴定,探讨其在胶质瘤发病机制中发挥的作用。结果:对治疗前胶质瘤组、治疗后胶质瘤组、健康对照组共3组样本进行检测分析,在0~50 000Da范围内经方差分析共得到有高度统计学意义的差异蛋白5个,其中在肿瘤组中呈高表达的有3个,分别为2 235.5±H、3 328.5±H、11 119.8±H Da,肿瘤患者中呈低表达的有2个,分别为7 517.3±H、12 841.7±H Da。对以上5种蛋白的数据在每两组间进行T检验分析,结果11 119.8±H、12 841.7±H Da蛋白含量在胶质瘤治疗后组与健康对照组间差异无统计学意义;2 235.5±H、3 328.5±H Da蛋白含量在这两组间具有统计学意义(P<0.05);其余蛋白在各组间均有高度统计学差异(P<0.01)。Biomark Pattern Systerm软件分析并自动选取7 517.3±H、11 119.8±H、12 841.7±H Da建立诊断模型,对胶质瘤治疗前组及健康对照组两组标本进行判别诊断,结果胶质瘤诊断准确性为95.8%(23/24);健康人诊断准确性为100%(12/12);总准确性为97.2%(35/36)。将差异蛋白在UniProt蛋白库查询显示:7 517.3±H Da与PSPHAR对应,其余4种蛋白没有相关对应结果。结论:本实验运用SELDI-TOF-MS技术在胶质瘤患者血清中共筛选出5种差异蛋白,以此建立的诊断模型能够较为准确地诊断出胶质瘤患者,为SELDI-TOF-MS在胶质瘤临床诊断的应用提供了理论依据;5种差异蛋白中,7 517.3±H Da的蛋白在UniProt蛋白库鉴定为PSPHAR,考虑可能PSPHAR在胶质瘤细胞中表达低下,失去了对细胞周期S期DNA交联、半保留复制的调控,从而对胶质瘤的发生起着十分重要的作用。
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