一种基于质谱的靶向代谢组学方法建立及应用研究

来源 :北京化工大学 | 被引量 : 4次 | 上传用户:erwewrasfrfa
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本研究通过使用标准品结合三重四极杆质谱的针泵模式建立了氨基酸、肉碱、以及一些氨基代谢物的质谱检测方法。并且优化了液相色谱使用的色谱柱、流动相、梯度模式、柱温等参数,建立了最优的液相色谱分离方法。脂质靶向代谢组学使用的是液相色谱联用高分辨质谱平台。代谢物使用了脂质相关数据库并根据二级结构进行定性。并且使用了部分标准品进行验证。最终定性了 300多种脂质代谢物。液相分离方法同样进行了优化。本研究针对建立的三种靶向组学检测方法,分别选用几种生物基质中不含有的所测代谢物的同位素或是同系物进行了随机的方法学验证。主要从检测限,定量限,线性,稳定性,精密度,回收率等方面验证方法的准确性与可靠性。结果显示,线性相关系数R2均大于0.999,日间日内精密度均小于5%。稳定性、精密度、回收率等也均满足靶向代谢组学实验要求。证明所建方法灵敏度高,准确性好,可以用于靶向组学研究。为了验证所建靶向组学方法的应用性,本研究使用建立的方法进行了生物基质的代谢组学分析。选用的生物基质为正常人与代谢综合征病人的血浆。仪器采集的数据使用相关软件进行数据处理与统计学分析。结果显示,代谢物检测结果有很好的稳定性与准确性。正常组与疾病组在氨基酸类、脂质类代谢物中有较大差异。综上所述,基于液相色谱-质谱联用平台,本研究建立了不同类型代谢物的靶向分析平台,并对建立的方法进行了实际生物基质的应用性研究。本研究所建立的靶向分析方法覆盖了氨基酸、肉碱、脂质等超过400种代谢物。这些代谢物涉及多条代谢通路,在生物体生长繁殖、保持它们的结构以及对外界环境做出反应等过程中都有重要作用。
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