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瓜拉纳（Paullinia cupana,Guarana）属无患子科,原产于巴西亚马逊盆地,其种子提取物中含有丰富的生物碱、多酚、植物多糖等成分,具有延缓衰老、抗氧化、改善记忆等功效,长期以来在日常饮食、医疗保健中被广泛使用,如今,瓜拉纳也逐渐被化妆品产业开发,并拥有广泛的消费人群。丁香精油是由桃金娘科植物丁香（Syzygium aromaticum.）的干燥花蕾提取而来的挥发性芳香物质,现代研究表明,丁香精油含有丰富的活性成分,如丁香酚、乙酰丁香酚、β-石竹烯等,具有消炎抗菌、改善粗糙皮肤、促进伤口愈合、促进药物的经皮吸收等作用,因此常被用于医药、食品、化妆品等领域。研究发现,瓜拉纳提取物（Guarana extract,GE）和丁香精油（Clove oil,CO）均具有较强的抗氧化作用,外用可延缓皮肤衰老,但同时也存在易挥发、溶解性能差、刺激性强等问题。为了改善药物的稳定性,增强药物的治疗效果,并降低药物的刺激性,本文利用纳米乳化技术,将瓜拉纳和丁香精油配伍作为模型药物,构建了瓜拉纳-丁香精油纳米乳（GE-CO-NE）载药递送系统,制备了一种安全有效、质量稳定的抗皮肤衰老经皮给药制剂,具体研究内容如下:1.GE-CO-NE的处方筛选与优化首先采用乙醇回流提取法制备的瓜拉纳提取液,其中瓜拉纳生药量为0.2g/m L;采用水蒸气蒸馏法提取丁香精油,精油得率约为11.53%。将丁香精油作为纳米乳的油相,通过伪三元相图筛选出纳米乳表面活性剂为RH 40,助表面活性剂为无水乙醇。采用DOE全因子设计,以表面活性剂、助表面活性剂和油相的质量占比为因素,将粒径大小和PDI作为评价指标,对纳米乳处方进行了优化,然后通过伪三元相图确定了纳米乳的最佳载药量为10%,得到GE-CO-NE的最终处方为:RH 40（10%）、无水乙醇（5%）、丁香精油（1%）、瓜拉纳提取液（10%）,水（74%）。2.GE-CO-NE的理化性质和稳定性评价对处方优化后的GE-CO-NE进行理化性质评价,并与未载药的空白丁香精油纳米乳（BCO-NE）的理化性质进行了比较。结果显示,GE-CO-NE为棕红色澄清透明液体,属于O/W型纳米乳,pH为5.85±0.02,粘度为26.8±0.2 m Pa·s,粒径大小为15.81±0.13 nm,PDI为0.109±0.012,Zeta电位为-2.67±1.24 mV;BCO-NE为无色澄清透明液体,pH为6.40±0.01,粘度为25.0±0.2 m Pa·s,粒径大小为14.09±0.04 nm,PDI为0.101±0.001,Zeta电位为-2.44±1.22 mV。相比于未载药的BCO-NE,药物的加入使纳米乳的颜色发生了改变,而对于纳米乳的pH、粘度、粒径、PDI和Zeta电位影响不明显（P>0.05）。对处方优化后的GE-CO-NE进行了稳定性考察,结果显示,GE-CO-NE在离心试验、冻融循环试验、加热-冷却循环试验中均未出现分层、破乳等不稳定现象,且纳米乳平均粒径和PDI均能在一定范围内保持稳定,表明GE-CO-NE具有一定动力学及热力学稳定性;在存储稳定性试验中,GE-CO-NE分别在4、25和40℃下保存90 d,试验期内所有GE-CO-NE均未出现分层、破乳等不稳定现象,且平均粒径和PDI均能在一定范围内保持稳定,表明GE-CO-NE具有一定的耐寒、耐热能力,且具有一定期限的存储能力。综合稳定性试验结果表明,GE-CO-NE稳定性良好,纳米乳配方合理。3.GE-CO-NE的体外释放和皮肤刺激性研究以GE-CO-NE中具有抗氧化、延缓皮肤衰老作用的主要效应成分儿茶素、咖啡因和丁香酚作为指标成分,建立了指标成分HPLC含量测定方法,并对其进行了方法学考察,结果显示方法线性关系良好,专属性、精密度、重复性、稳定性和加样回收试验均符合要求。采用Franz扩散池法对GE-CO-NE的经皮渗透性能进行了考察,对比分析了GE-CO-NE与瓜拉纳-丁香精油普通混合液（GE-CO-M）的透皮性能。结果显示,儿茶素、咖啡因和丁香酚在GE-CO-NE和GE-CO-M中的经皮渗透均符合Higuchi方程,说明两种药物载体均具有缓释作用;但GE-CO-NE中儿茶素、咖啡因和丁香酚的累积渗透量、渗透速率及皮肤滞留量均高于GE-CO-M,表明GE-CO-NE的经皮渗透性能优于GE-CO-M。考察了GE-CO-NE和空白纳米乳基质（Blank-NE）的皮肤刺激性,并与GE-CO-M进行比较。以豚鼠作为试验研究对象,通过单次和多次给药皮肤刺激试验对GE-CO-NE、Blank-NE和GE-CO-M的刺激性进行了评估与比较。结果表明,GE-CO-NE和Blank-NE无论是单次给药还是多次给药均对皮肤无刺激,而GE-CO-M在单次给药和多次给药皮肤刺激试验中均显示为轻度刺激性,说明GE和CO制备成GE-CO-NE后,药物对皮肤的刺激性降低。4.GE-CO-NE抗皮肤衰老药效学考察通过DPPH自由基清除试验考察了GE-CO-NE的抗氧化能力,并与GE-CO-M和单方的GE与CO抗氧化能力进行了比较。试验拟合了GE-CO-NE、GE-CO-M、GE和CO对DPPH自由基的清除率曲线,计算各药物的半数抑制浓度(IC50),结果发现,四种供试药物的IC50:GE-CO-NE≈GE-CO-M<CO<GE,表明GE-CO-NE与GE-CO-M的IC50无明显差异,且均低于单方的GE与CO,说明GE-CO-NE与GE-CO-M能在较低的浓度下达到抗氧化的效果,也就是说GE-CO-NE与GE-CO-M的抗氧化能力均强于单方的GE与CO,GE-CO-NE与GE-CO-M的抗氧化能力基本相同,说明纳米乳辅料未对药物的抗氧化能力产生影响。通过D-半乳糖联合紫外光照射建立了小鼠皮肤衰老模型,考察了外涂GE-CO-NE、GE-CO-M、GE和CO干预对衰老皮肤的影响。结果显示,药物的干预可以减少皮肤褶皱的产生、增加皮肤的含水量、提高皮肤内SOD酶活性、提高Hyp含量、降低MDA的产生、增厚表皮真皮层、增加皮肤胶原纤维的比例,较模型组有明显差异（P<0.05）。综合实验结果表明,GE-CO-NE和GE-CO-M组小鼠皮肤内SOD酶活性、Hyp含量及胶原纤维比例均高于单方的GE和CO组,表皮真皮增厚程度较单方的GE和CO组更为明显,且脂质过氧化物MDA的产生较单方的GE和CO组更少,说明复配后的瓜拉纳提取液和丁香精油对衰老皮肤的改善效果优于单方的GE和CO,另外,相同浓度下的GE-CO-NE的抗皮肤衰老效果也稍强于GE-CO-M,表明纳米乳作为给药载体也对药物的疗效产生一定的积极作用。