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慢性胰腺炎(Chronic pancreatitis,CP)是指由多种因素所引发的胰腺慢性、进展性炎症,其基本病理学改变是炎细胞浸润,腺泡萎缩或坏死,弥漫性纤维化或钙化等表现。在持续的炎症刺激下,患者最终可出现长期难以缓解的腹痛和胰腺内外分泌功能异常的临床症状。在胰腺损伤、炎症或毒性物质刺激下,胰腺星状细胞(Pancreatic stellate cells,PSCs)由静息转变为激活状态,持续活化的PSCs合成并分泌大量胶原纤维沉积于胰腺间质,是胰腺纤维化发生与进展的中心环节。TGF-β1是PSCs体外激活的最强刺激因子之一,TGF-β信号通路在纤维形成中具有重要作用。Smurf2和Smad7是TGF-β信号通路的主要抑制因子,目前已在多种人体及动物纤维化疾病中发现其异常表达并参与纤维化发病过程,但尚无在CP患者及动物CP模型中表达及作用的研究报道。持续的氧化应激和(或)促炎因子(如IL-1β,IL-6,TNF-α等)释放并广泛激活PSCs是CP纤维化的主要发病机制之一,抗氧化剂和具有抗炎、抗氧化作用的植物多酚能改善CP患者症状,减轻CP动物胰腺炎症和纤维化程度。Omega-3是一种必需脂肪酸,其代谢产物EPA和DHA是构成人体细胞磷脂膜的重要来源,在机体的多种功能调控中具有重要作用。研究证实,Omega-3能通过抗炎、抗氧化作用抑制人体的多种急、慢性炎症反应,减轻模型动物的肝脏、肾脏、肺脏和心肌纤维化,但Omega-3对CP的治疗效果目前未见报道。第一部分制备大鼠CP模型及模型验证目的:制备并评价大鼠CP模型,为后续CP在体实验提供模型基础。方法:雄性Wistar大鼠20只随机平均分为CP组和对照组,CP组予以二丁基二氯化锡(DBTC)与100%乙醇、灭菌甘油混合溶剂大鼠尾静脉单次注射(8mg.ml-1.kg-1),对照组大鼠尾静脉单次注射等体积100%乙醇与灭菌甘油混合剂。造模后0天、7天、14天、21天、28天测量各组大鼠体重并于造模4周后处死全部大鼠。组织苏木精-伊红(hematoxylin-eosin,HE)染色比较两组大鼠胰腺组织学评分,α-SMA免疫组化染色和Real-time RT-PCR测定比较两组PSCs激活水平,Masson染色和胰腺组织羟脯氨酸含量测定比较两组胰腺胶原纤维沉积。结果:4周后对照组大鼠存活率100%,发育和活动正常,胰腺大体形态,组织HE评分,Masson染色见正常胰腺组织结构。DBTC造模成功率为60%,CP大鼠体重增长缓慢,胰腺平薄,充血、水肿明显,HE染色,Masson染色见CP改变。两组胰腺组织α-SMA表达水平和羟脯氨酸含量比较有显著性差异(P<0.05)。结论:DBTC诱导大鼠CP方法经济简单,成功率可接受,模型有明显CP病理特点,是目前研究CP发病机制及干预的理想模型之一。第二部分Smurf2和Smad7在大鼠CP模型中表达及意义目的:测定Smurf2和Smad7在CP大鼠胰腺表达水平并探讨其意义。方法:雄性Wistar大鼠12只随机平均分为CP组和对照组。CP组DBTC与100%乙醇、灭菌甘油混合溶剂大鼠尾静脉单次注射(8mg.ml-1.kg-1)制备CP模型,对照组大鼠尾静脉单次注射等体积100%乙醇与灭菌甘油混合剂。造模4周后处死全部大鼠,HE染色比较两组大鼠胰腺组织学评分,α-SMA免疫组化和Real-time RT-PCR测定比较两组PSCs激活水平,Masson染色和胰腺羟脯氨酸含量测定比较两组胰腺胶原纤维沉积,免疫组化半定量比较两组Smurf2/Smad7蛋白相对表达量,Real time RT-PCR相对定量检测两组Smurf2/Smad7 m RNA相对表达量。结果:与正常大鼠相比,DBTC使模型组大鼠胰腺组织发生明显CP改变,羟脯氨酸含量显著升高。CP组大鼠胰腺组织Smurf2蛋白的免疫组化半定量,Smurf2和Smad7 m RNA Real time RT-PCR相对定量显著高于正常对照组,而Smad7蛋白的免疫组化半定量表达水平显著低于正常对照组(P<0.05)。结论:CP大鼠胰腺组织中Smurf2和Smad7表达失衡提示其可能通过TGF-β信号途径参与胰腺慢性炎症反应和纤维化进程。第三部分Omega-3减轻大鼠CP作用的机制研究目的:观察Omega-3对大鼠CP作用效果并探讨可能机制。方法:雄性Wistar大鼠18只随机平均分为CP+Omega-3组,CP组和正常对照组。CP+Omega-3组和CP组采用DBTC与100%乙醇、灭菌甘油混合溶剂大鼠尾静脉单次注射(8mg.ml-1.kg-1)制备CP模型,正常对照组大鼠尾静脉单次注射等剂量100%乙醇与灭菌甘油混合剂。造模三天后治疗组予以Omega-3(1000mg.kg-1.day-1)每日灌胃,CP组与正常对照组灌以等剂量大豆油。于灌胃4周后处死全部大鼠,HE染色比较各组大鼠胰腺组织学评分,Masson染色,羟脯氨酸含量测定比较各组胰腺胶原纤维沉积,胰腺组织丙二醛和总超氧化物歧化酶(SOD)活力测定比较各组胰腺氧化应激水平,免疫组化和Real-time RT-PCR比较各组α-SMA,TGF-β1蛋白及m RNA表达水平。结果:与CP组相比,Omega-3能减轻大鼠胰腺组织学评分及胰腺胶原纤维沉积,降低大鼠胰腺组织丙二醛含量并增强总SOD活力。Omega-3组大鼠胰腺组织α-SMA和TGF-β1表达水平要明显低于CP组并高于正常对照组。结论:Omega-3能通过抗炎和抗氧化应激及抑制胰腺α-SMA、TGF-β1高表达减轻大鼠胰腺慢性炎症和胶原纤维沉积。以上各部分实验结果分别说明DBTC尾静脉注射制备大鼠CP模型操作方便简单,成本低且成功率较高,符合人类CP病理过程,是研究CP早期发病机制,晚期组织学变化,内分泌功能损害及神经性痛疼发生机制的理想模型;Smurf2和Smad7可能通过TGF-β信号途径参与大鼠胰腺慢性炎症反应和纤维化进程;Omega-3能抑制胰腺α-SMA、TGF-β1高表达并通过抗炎、抗氧化机制减轻大鼠胰腺慢性炎症反应和纤维生成,其可能对人类CP治疗有益。