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研究背景及目的:虽然胃癌(gastric cancer,GC)近几十年来发病率不断下降,但仍是我国第二大常见癌症,严重威胁人类的身体健康。胃癌的早期侵袭转移是导致患者不良预后的一个重要原因,由于肿瘤的远处转移,使得患者的死亡率显著升高,因此抑制肿瘤细胞的转移成了胃癌治疗研究中的重要一步。乙酰肝素酶(Heparanase,Hpa,HPSE)是人体一种极其重要的内源性糖苷内切酶,它能够特异性的剪切硫酸乙酰肝素蛋白多糖(Heparan sulfate proteoglycans,HSPGs)的侧链硫酸乙酰肝素(Heparan sulfate,HS),从而可明显促进肿瘤的侵袭转移。而乙酰肝素酶2(Heparanase-2,Hpa2,HPSE2)作为HPSE的同源物,由McKenzie团队于2000年首次克隆。与HPSE不同的是,HPSE2并没有肝素酶的酶活性,不能特异性的剪切HSPG,但HPSE2却仍然保留了结合HS的能力,并且相比HPSE有着更高的亲和力,能竞争性结合HS,从而抑制肝素酶的活性。既往研究表明,HPSE在胃癌中的表达相较癌旁组织明显升高,与胃癌的TNM分期、生存预后有着密切关系。然而,HPSE2在胃癌中的表达及作用并不清楚。本研究拟阐明HPSE2在胃癌中的表达及其对胃癌迁移侵袭的作用及机制,为胃癌侵袭转移及诊治提供新的依据。研究内容及研究方法:1.将胃癌组织芯片分别进行HPSE2和HPSE的免疫组化染色,分析表达水平与临床特征相关性,分析生存以及预后影响因素。2.构建稳定过表达HPSE2的胃癌细胞株SGC7901和MKN28,Transwell检测HPSE2过表达对胃癌细胞迁移侵袭的影响。3.mRNA表达谱芯片筛选HPSE2参与调控的与迁移侵袭相关的基因。4.通过实时定量PCR(Real-time Quantitative PCR,qRT-PCR)及免疫印迹(Western blot,WB)阐明HPSE2参与调控上述基因的信号机制。结果:1.HPSE2在胃癌和癌旁组织中均存在阳性表达,HPSE2在癌旁组织表达明显高于胃癌组织。HPSE2表达与临床分期、年龄、肿瘤大小及淋巴结转移呈负相关(P<0.05)。高表达HPSE2胃癌患者的中位生存时间和累积生存率均明显高于低表达胃癌患者。Cox回归分析表明,临床分期、淋巴结转移、肿瘤大小及HPSE2表达是影响胃癌患者预后的独立因素。2.SGC7901、MKN28细胞过表达HPSE2可明显抑制其迁移和侵袭能力。3.mRNA表达谱芯片检测分析发现,HPSE2可通过影响基质金属蛋白酶9(Matrix metalloproteinase 9,MMP9)、钙粘附蛋白E(E-cadherin)、转化生长因子-β1(Transforming growth factor-β1,TGF-β1)等基因表达而参与肿瘤迁移和侵袭的调控。4.机制研究发现,HPSE2可抑制NF-κB及Wnt/β-catenin信号通路而参与上述基因的调控。结论:HPSE2在胃癌组织低表达,表达水平与患者临床特征、生存预后密切相关,并可作为预测患者预后风险的重要因素。HPSE2可通过抑制NF-κB、Wnt/β-catenin信号通路而调控MMP9、E-cadherin等基因的表达,减少Ⅳ型胶原蛋白的降解,维持细胞外基质成分,从而抑制胃癌细胞迁移和侵袭,为胃癌侵袭转移的诊治提供了新的依据。