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目的观察血清促甲状腺激素(thyroid stimulating hormone,TSH)对脂肪细胞炎症因子肿瘤坏死因子-α(Tumor Necrosis Factor-α,TNF-α)、脂联素(Adiponectin,ADPN)分泌的影响,并探讨其机制,初步研究TSH与动脉粥样硬化的相关性。方法1.小鼠3T3-L1前脂肪细胞体外诱导为成熟脂肪细胞将小鼠3T3-L 1前脂肪细胞进行体外培养,并通过经典的鸡尾酒诱导方案诱导分化为成熟脂肪细胞。为研究TSH在成熟脂肪细胞中对炎症因子的作用机制奠定了基础。2.TSH对成熟3T3-L1脂肪细胞TNF-α分泌的影响通过ELISA检测血清TSH刺激成熟脂肪细胞不同时间段培养液中TNF-α水平,确定为以下实验中TSH刺激成熟脂肪细胞的时间。用不同浓度血清TSH(0.01μM、0.1μM、1μM)、1μM cAMP激动剂(Forskolin)以及经10μM蛋白激酶A抑制剂(H89)干预15分钟后再予以1μM血清TSH分别刺激成熟脂肪细胞后,通过ELISA、Western blotting、Real-Time PCR检测培养基中 TNF-α 浓度、NF-κ B P65蛋白表达以及TNF-α mRNA的变化。同时,通过免疫共沉淀检测IκB/PKAc蛋白复合物。3.TSH对成熟3T3-L1脂肪细胞ADPN分泌的影响采用不同浓度牛TSH(0.01μM、0.1μM、1μM)刺激成熟脂肪细胞后,通过 ELISA、Western blotting、Real-Time PCR 检测培养基中ADPN浓度、PPAR Y蛋白表达以及ADPN mRNA的变化。结果1.成功将3T3-L1前脂肪诱导为成熟脂肪细胞,并经油红0染色鉴定。2.随着TSH刺激时间延长,诱导分化成熟的3T3-L1脂肪细胞培养基内TNF-α浓度呈上升趋势,刺激4h后达到峰值(P<0.05)。与PBS组相比,随TSH刺激浓度的增加,培养基中TNF-α水平、细胞中TNF-α mRNA水平呈上升趋势(P<0.05),NF-K B p65蛋白表达水平亦呈上升趋势。与PBS组相比,Forskolin刺激组培养基中TNF-α水平明显升高(P<0.05);与PBS组相比,H89干预后的培养基中TNF-α水平未见明显升高(P>0.05)。通过免疫共沉淀检测出IκB/PKAc复合物蛋白。3.随着TSH刺激浓度的增加,脂肪细胞ADPN的分泌显著减低,PPAR Y、ADPN mRNA的表达亦降低。结论1.TSH通过环腺苷酸-蛋白激酶 A(cyclic AMP-protein kinase A,cAMP-PKA),活化核转录因子(nuclear factor,NF-κ B),促进脂肪细胞TNF-α的分泌,进而参与动脉粥样硬化的发生。2.TSH抑制ADPN的分泌和表达,并使PPAR Y蛋白的表达降低。