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本研究在筛选出一种合成培养基的基础上,研究了葡萄糖、氯化铵对中生菌素产生菌发酵产素的影响,并进行了补糖、补氮对发酵影响的研究。本论文研究内容对进一步提高中生菌素产素水平,降低生产成本具有一定的指导意义。其主要研究内容有以下几个方面:1.研究用菌种的选择及合成培养基的筛选 对几株发酵效价较高的菌株UV-69、UV-59、UV-66、UV-27、UV-7、B-7进行发酵对比,选定UV-69作为本研究的实验菌种。 经过发酵对比选定谷氨酸钠作为合成培养基的有机氮源,氯化铵作为无机氮源。之后,采用正交试验对碳源(葡萄糖、淀粉)、氮源(谷氨酸钠、氯化铵)、磷酸二氢钾进行优化,确定本研究所用合成培养基配方。2.合成培养基中起始葡萄糖浓度对发酵产素的影响 利用合成培养基进行摇瓶发酵,设置1.5%、2.5%、3.5%和4.5%四个不同起始葡萄糖浓度,分别进行发酵,中间对发酵过程进行监测。实验结果表明,培养基中葡萄糖的含量对菌体的生长有较大的影响,能够改变其生长模式。在不同水平葡萄糖加量实验中,随着培养基中起始葡萄糖含量的增加,对数生长期的菌体生长速率越来越快,其生物量越来越高,且其生物量达到最大值的时间越来越晚。同时,当培养基中葡萄糖起始浓度达到2.5%以上后,会对产素发生抑制作用。对不同葡萄糖加量实验结果加以对比,推测在产素高峰期产素菌仍处于较为活跃的生长状态,生长量持续增加,可能是培养基中较高的起始葡萄糖浓度(>2.5%)抑制产素的原因。3.合成培养基中起始氯化铵浓度对发酵产素的影响 利用合成培养基进行摇瓶发酵,设置0.2%、0.3%、0.4%、0.5%、0.6%和0.7%六个不同氯化铵起始浓度,分别进行发酵,对发酵过程进行监测。实验结果表明,随着培养基中氯化铵起始浓度的增加,生物量逐渐降低,而 中国农科院研究生院 硕士学位论文发酵效价却没有显著的变化,说明一定浓度的氯化铰(>.5%)对中生菌素产生菌的菌体生长有较大抑制作用,而对其产素并不抑制。而比较几种不同浓度氯化按发酵的单位生物量产素率后可知,氯化按对产素有一定促进作用。 根据实验结果可以推测,中生菌素的生物合成与其产生菌发酵的初级代谢有较大关系,在初级氮代谢阶段生成的初级氮代谢产物中可能有中生菌素生物合成的前体物质,这些物质的含量水平决定了产素量。4.发醇过程中补加葡苟槽对产羹的影响 实验结果表明,补加葡萄糖对产素有促进作用,这种促进作用主要是由于生物量的增加而产生的。在对数生长期之后,产素高峰期之前这段时间 门436小时)补加低浓度的葡萄糖对效价有较大的提高。在这之前或之后,补加葡萄糖效果都不显著。而且补加葡萄糖应该遵循多次补加,每次少补的原则。5.发酵过趋中补加汛化俊对产羹的彤响 实验结果表明,在对数生长期门 小时)补加氯化镣对产素有促进作用,但会对菌体的生长产生抑制作用。补加的氯化铰越多对菌体生长的抑制作用越大。补加时也应遵循多次补加,每次补加量少一些的原则。这一部分的实验结果也证明中生菌素生物合成与菌的初级氮代谢具有较大关系。6.补糟及朴氨实验结果的验证 利用复杂培养基进行的摇瓶发酵结果验证了由合成培养基发酵得到的实验结果,说明在发酵过程中特定时间补加一定量的葡萄糖或氯化铰能够提高发酵效价。但补加量的问题并没有得到验证,前后结果之间有差异。 在大罐发酵中采取补糖措施,结果证明在发酵过程中补加葡萄糖能大幅度*0习5%)提高发酵效价。但大罐发酵中补加葡萄糖时配合补加氯化按的结果却不够理想,没有验证摇瓶发酵实验的结果。