用Calreticulin-Like蛋白治疗血管瘤的研究

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血管瘤是毛细血管的异常增生,是儿童的常见病和多发病。当前,在治疗血管瘤上没有特效的药物。血管生成抑制因子是特异抑制血管内皮细胞增殖的蛋白质。本论文研究用Careticulin-like蛋白治疗血管瘤。应用套叠PCR合成careticulin-like序列,构建含careticulin-like基因的毕赤酵母表达载体pPIC9K-careticulin-like,通过电转法将表达载体转化毕赤酵母基因组,通过G418抗性筛选高基因拷贝重组子,获得工程菌GS115(pPIC9K-careticulin-like)。在发酵罐中进行高密度发酵GS115(pPIC9K-careticulin-like)表达重组蛋白。用离子交换法纯化重组Careticulin-like蛋白。纯化的目标蛋白具有抑制CAM血管生成的活性。Careticulin-like蛋白诱发血管瘤细胞凋亡,其主要表现是细胞固缩。公鸡的肉垂是天然的血管瘤模型。本研究以60日龄公鸡的肉垂为血管瘤模型,进行用Careticulin-like蛋白治疗血管瘤试验。在试验组右侧肉垂每天注射Careticulin-like蛋白20μ g,对照组左侧肉垂每天注射等体积的PBS。在用药14天后,治疗组的肉垂长度为平均1.90cm,对照组的肉垂长度为平均2.52cm,呈显著性差异(P<0.001);试验组用药侧肉垂平均血管数量为个/100个视野,对照组的血管数量是为个/100个视野,两组之间的血管数量呈显著性差异(P<0.001);对照组的用药部位组织细胞正常,而由于缺少血管供给营养的试验组,其用药局部出现明显组织凋亡。实验组鸡的体重平均增长275g/只,对照组鸡的体重平均增长325g/只,两组之间体重的变化没有显著性差异(0.1<P<0.25)。以上结果表明Careticulin-like蛋白能有效地抑制血管瘤细胞的增殖,有效地抑制血管瘤模型的血管的增殖和抑制血管瘤的发展。具有开发为治疗血管瘤药物的前景。
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