Aspergillus sp.48菌所产酶转化人参二醇类皂苷生成C-Mc等稀有皂苷的研究

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本论文研究了以生物转化法制备稀有人参皂苷C-Mc、C-K、C-Y、F2和GypLXXV,其反应底物为人参二醇类皂苷(PPD),菌种为Aspergillus sp.48菌;再利用人参提取物复合酶将F2转化为Rh2组的方法;并利用核磁共振对人参皂苷C-Mc进行了结构鉴定。以Aspergillzus sp.48菌作为产酶菌种进行培养,获得的酶液用来制备稀有人参皂苷。经过测试最佳反应条件为底物浓度为7%,最佳反应时间为36 h。以上述测试结果为条件,56.0g PPD加入反应器中进行生物转化,反应温度45℃。将酶反应所得的产物经AB-8大孔吸附树脂脱糖、D-280离子交换树脂脱色、浓缩干燥处理后,得到粗品40.0 g,得率71.4%。再将这40.0 g人参皂苷粗品采用硅胶柱层析法分离,洗脱剂为V(氯仿):V(甲醇)V(水)=9:1:0.03。将分离得到的相对较纯稀有人参皂苷单体称重,得到 C-Mc,0.70 g,得率 1.80%;C-K,18.3 g,得率 45.7%;C-Y,1.26 g,得率 3.15%;F2,3.49 g,得率 8.72%;GypLXXV,0.14 g,得率 0.35%。用高效液相色谱对人参皂苷C-Mc、C-K、C-Y、F2进行检测,检测结果为:C-Mc,纯度68.23%;C-K,纯度 95.27%;C-Y,纯度 74.85%;F2,纯度 99.87%。采用人参提取物复合酶对3.49 g F2进行转化,转化后的粗品经硅胶层析分离后共得到20(S)-Rh2与20(R)-Rh2的混合物2.22 g,得率为63.6%。取该混合物2.0 g,利用结晶法制备20(S)-Rh2,得到纯度为76.17%的20(S)-Rh2 0.16 g,得率8%。用核磁共振对实验所得的稀有人参皂苷单体C-Mc进行结构测定,确定其为人参皂苷C-Mc,系统名称为20-O-[α-L-呋喃阿拉伯糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基]-20(S)-原人参二醇,分子式为:C41H70O12。
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