研究背景：肾脏是药物毒性的重要靶器官之一。药物源性肾脏损伤包括肾小球滤过功能障碍和肾小管功能障碍。庆大霉素是临床上广泛使用的抗生素,因其疗效确实,价格便宜,故深为临床医生乐用,但也有滥用倾向,其主要副作用肾毒性反应屡有报道。研究表明:庆大霉素进入人体后，其化学结构稳定，几乎不被代谢,绝大部分经肾小球以原形滤过,一部分被近端肾小管重新吸收,另一部分庆大霉素可经肾小管周围血管直接被肾小管上皮细胞摄取,导致药物聚集在肾皮质。晚期会出现肾小管坏死,肾小管阻塞，肾小球滤过率下降等肾功能损伤的改变，进而危及生命。因此研究庆大霉素诱导肾损伤的机制不仅具有较高的临床应用价值，而且具有较高的基础理论价值。PHB蛋白（Prohibitin protein）是广泛存在高度保守的一种蛋白，通过其独特的分子伴侣参与不同的生理病理过程。大量研究已经表明它可以通过调节基因转录和维持线粒体蛋白的稳定性抑制肿瘤细胞的增殖和凋亡；此外，它可抑制氧化应激引起的线粒体损伤参与心肌缺血再灌注损伤的保护作用。最近研究表明PHB蛋白参与肾小管间质纤维化，与肾小管间质损伤程度呈现负相关，暗示它可能是肾损伤潜在的治疗靶点。因此我们探讨PHB蛋白在庆大霉素诱导肾损伤过程中的作用。研究表明作为有效的组蛋白去乙酰化酶抑制剂，丁酸钠是具有抗抑郁，改善记忆功能，防止心肌缺血和再灌注损伤和减轻急性肺损伤和减少炎性细胞因子等作用。最近研究表明丁酸钠可以降低肾损伤大鼠NF-κB的激活；然而，丁酸钠对庆大霉素诱导肾损伤的影响尚未见报道。目的：本研究应用庆大霉素慢性给药诱导大鼠肾损伤，观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂对肾损伤的影响，并进一步研究prohibitin蛋白在肾损伤中的作用。方法：本研究首先建立庆大霉素诱导肾损伤模型。对照组大鼠腹腔注射生理盐水。庆大霉素组大鼠腹腔注射不同剂量的庆大霉素（高剂量组150mg/kg、中剂量组100mg/kg和两个低剂量组50mg/kg与25mg/kg），连续给药8天，建立庆大霉素诱导肾损伤模型。大鼠用戊巴比妥钠麻醉后，腹主动脉取血，检测血清尿素氮和肌酐水平。代谢笼中收集尿液，检测Kim-1和NGAL含量。大鼠麻醉后取肾脏，放入预先配好的10％福尔马林固定液中，进行HE染色，观察庆大霉素诱导肾损伤的组织学改变。组蛋白的去乙酰化能到抑制转录因子与相关基因特异性结合，从而影响基因的转录。为研究组蛋白去乙酰化酶在庆大霉素诱导肾损伤中的作用，我们采用组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠为研究对象。研究表明丁酸钠可有效增加转录活跃区组蛋白的乙酰化，促进转录因子与相关基因特异性结合，诱导非特异性基因表达的增加。在本研究中我们探讨了丁酸钠急慢性处理对100mg/kg庆大霉素诱导肾损伤的影响。100mg/kg庆大霉素连续给药8天，建立庆大霉素诱导肾损伤模型，在每日给庆大霉素前30分钟腹腔注射不同剂量的丁酸钠（高剂量组200mg/kg、中剂量组100mg/kg和低剂量组50mg/kg），研究丁酸钠慢性处理对庆大霉素诱导肾损伤的作用。在连续给庆大霉素后的第八天给一次丁酸钠，研究丁酸钠急性处理对庆大霉素诱导肾损伤的影响。并应用HE染色方法观察庆大霉素诱导肾损伤过程中，组蛋白乙酰基转移酶对庆大霉素诱导肾损伤的影响。本研究使用免疫组化、Western blot等法检测庆大霉素诱导肾损伤时prohibitin蛋白的表达情况及组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠对肾损伤时prohibitin蛋白的影响。结果：不同剂量的庆大霉素在连续给药8天后，血清中的BUN和CRE明显增高，表明庆大霉素能够诱导肾损伤。具体表现为：庆大霉素高剂量组150mg/kg和中剂量组100mg/kg明显增加了肾脏损伤时血清BUN水平（P<0.01，P<0.01）；两个低剂量组25mg/kg和50mg/kg也看到了类似的BUN升高（P<0.05，P<0.05）。同样不同剂量的庆大霉素明显增加了血清中的CRE水平，与生理盐水组比较具有显著地统计学意义。低剂量组25mg/kg无统计学意义（P>0.05）。不同剂量的庆大霉素在连续给药8天后，尿液中尿蛋白标记物Kim-1和NGAL明显增高。与生理盐水比较，具有显著的统计学意义。此外，肾损伤大鼠的每日平均进食量进水量，体重明显降低，与正常组大鼠比较具有显著的统计学意义。通过观察不同剂量庆大霉素对肾损伤过程中血清中的BUN和CRE变化，及尿液中尿蛋白标记物Kim-1和NGAL水平的变化，我们选取中剂量组100mg/kg庆大霉素连续给药8天诱导肾损伤，并达到预期肾损伤效果。HE染色结果表明：不同剂量的庆大霉素组大鼠肾损伤明显，组织学上可见大量小管上皮细胞崩解、坏死，管腔内有大量由坏死脱落的上皮细胞形成的管型。为探讨组蛋白乙酰化修饰是否参与庆大霉素诱导的肾损伤，我们研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂急性慢性处理，观察其对庆大霉素诱导肾损伤过程中，血清CRE和BUN及尿液中尿蛋白标记物Kim-1和NGAL水平的影响。结果表明：丁酸钠慢性处理明显降低庆大霉素诱导肾损伤时血清BUN和CRE水平（P<0.05）；而不同剂量丁酸钠急性处理对血清BUN和CRE水平无明显的影响。同时丁酸钠慢性处理后尿液中尿蛋白标记物Kim-1和NGAL水平明显降低。HE染色组织学观察表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂慢性处理明显改善庆大霉素诱导肾损伤，而急性处理对庆大霉素诱导的肾损伤并没有明显的改善作用。我们研究表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂慢性处理能明显改善庆大霉素诱导肾损伤。采用免疫组化方法检测庆大霉素诱导肾损伤过程中PHB蛋白表达，结果显示肾损伤过程中PHB蛋白表达明显降低。进一步研究发现组蛋白去乙酰化酶抑制剂慢性处理，在连续给药8天后，明显增加庆大霉素诱导肾损伤过程中PHB蛋白的表达；为了进一步证实我们的研究结果，我们采用Western blot方法检测组蛋白去乙酰化酶抑制剂对庆大霉素诱导肾损伤过程中PHB蛋白表达的影响。免疫印迹实验表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂慢性处理，明显增加庆大霉素诱导肾损伤过程中PHB蛋白的表达，进一步表明组蛋白去乙酰化酶抑制剂可能通过增加PHB蛋白表达发挥其对肾损伤的保护作用，与免疫组织化学结果相一致。结论：本研究结果显示，庆大霉素能够明显诱导肾脏损伤，组蛋白去乙酰化酶抑制剂能够改善庆大霉素诱导的肾损伤，其潜在机制可能是与提高PHB蛋白的表达有关。本研究为肾损伤的治疗提供了新的治疗策略和理论依据。